Диффузионные методы

Диффузионный метод основан на регистрации диаметра зоны ингибиции (задержки) роста исследуемого микроорганизма. Метод менее чувствителен и менее точен, чем метод стандартных разведений, но на практике применяется чаще из-за своей простоты. Следует помнить, что скорость диффузии в агаре любого препарата зависит от его структуры, молекулярной массы, наличия примесей, состава и рН среды.

Метод бумажных дисков (дискодиффузионный метод).

Метод наиболее прост и широко используется в клинической практике. Образование зоны ингибиции роста происходит в результате диффузии антибиотиков из носителя (диска) в питательную среду (рис. 11). В определенных пределах величина диаметра зоны ингибиции роста жестко связана с величиной МИК. Метод позволяет лишь косвенно судить о величине МИК. Основным результатом является отнесение микроорганизма к одной из категорий чувствительности.

Для проведения этого метода используют стандартные диски, содержащие определенное количество антибиотиков, и стандартную питательную среду, необходимую для роста данного вида микроорганизма. Из суточной микробной культуры готовят взвесь на физиологическом растворе (1 млрд. микробных тел в 1 мл) и разводят ее в 10 раз. На поверхность чашки с плотной средой наносят 1 мл микробной культуры и покачиванием чашки или стерильным шпателем равномерно распределяют ее по всей поверхности среды. Остаток удаляют пипеткой или сливают в дезинфицирующий раствор. Среду подсушивают 10-15 мин при комнатной температуре, после чего на поверхность газона стерильным пинцетом накладывают диски с антибиотиками (не более 6 на чашку диаметром 10 см) на расстоянии >1,5 см друг от друга и от краев чашки. Условия инкубации зависят от вида микроорганизма (для большинства видов – в термостате при 37оС 24 часа).

Учет проводят в падающем свете на фоне темной поверхности, измеряя диаметр зоны задержки роста (с учетом диаметра диска). Оценку результатов проводят по специальной таблице (обычно прилагается к набору дисков для определения чувствительности к антибиотикам) путем сопоставления диаметра зон задержки роста испытанной культуры с пограничными значениями диаметра зоны в таблице. Исследуемую культуру относят к одной из трех категорий: чувствительная, умеренно-чувствительная и устойчивая.

Описанный метод является полуколичественным. Для получения количественных результатов используют методы серийных разведений.

Е-тест (E-test или эпсилометрический метод).

Метод близок по технологии постановки к методу бумажных дисков. В качестве носителя используется узкая полоска полимера (0.5х6.0 см), пропитанная различными концентрациями антибиотиков (от минимальных до максимальных). Ингибиция роста микроорганизма вокруг полоски носителя происходит в зоне, где концентрация антибиотиков, диффундирующего из носителя, выше МИК (рис. 12). Концентрации антибиотиков нанесены на соответствующем отрезке поверхности носителя. Величину МИК учитывают в том месте, где граница зоны ингибиции роста вплотную подходит к носителю. Е-тест сочетает простоту постановки метода бумажных дисков и точность метода серийных разведений.