Методы выявления и исследования простейших

Пироплазмиды

Для выявления пироплазмид исследуют мазки крови от животных, больных или подозреваемых в заболевании. В слу­чае гибели или вынужденного убоя больных животных мазки можно готовить из содержимого сосудов мозга, селезенки, пе­чени, почек, легких и пораженных лимфатических узлов. Маз­ки готовят только из органов свежих трупов, так как в них паразиты быстро лизируются, особенно при высокой темпера­туре окружающей среды. В необходимых случаях принимают меры для исключения инфекционных болезней.

Используют хорошо обезжиренные стекла. Кровь для ис­следования лучше всего брать из периферических сосудов ушной раковины. Место взятия подготавливают путем выстригания волосяного покрова, затем проводят дезинфек­цию и обезжиривание этиловым спиртом, спиртом-эфи­ром. Инъекцию проводят иглой или подрезают ножницами кончик уха.

Каплю крови в диаметре не более 2-3 мм, выступающую на месте прокола, наносят на край обезжиренного предметно­го стекла и делают мазок. Очень важно мазок подготовить с первой капли крови, т.к. в ней значительно больше поражен­ных пироплазмидами эритроцитов. Следующий мазок необ­ходимо готовить из свежей капли крови после удаления сгус­тка с места инъекции.

Изготовление мазков необходимо проводить в период повышения температуры тела животных и появления первых клинических признаков, до введения специфических препара­тов. Мазки просушивают на воздухе 10-20 мин, избегая воз­действия прямых солнечных лучей и ограничивая доступ мух. Затем их подписывают иглой или простым карандашом, ука­зывая вид и номер животного, дату и место взятия.

Для фиксации используют метиловый спирт, которым за­ливают мазки крови на 3-5 мин, после этого стекла вынима­ют и высушивают 15-20 мин.

Можно фиксировать смесью равных частей абсолютного этилового спирта и эфира или только этиловым спиртом 15-20 мин.

Хорошо подготовленный мазок должен быть равномерным и тонким. В толстых мазках эритроциты и находящиеся в них паразиты обнаруживаются с большим трудом.

Окраску можно производить по Романовскому-Гимзе. Для приготовления рабочего раствора краски на 1 мл дистиллированной воды добавляют 1-3 капли основного раствора краски. Рабочий раствор лучше всего подслаивать под стекло с мазком. В этих случаях на мазке не остается микрочастиц нерастворившейся краски, что облегчает при мик­роскопии поиск кольцевидных форм пироплазмид и диффе­ренциальную диагностику. Длительность прокрашивания маз­ков составляет 30-40 мин. По истечении этого срока краску смывают, мазок промывают дистиллированной водой, высуши­вают и исследуют с использованием микроскопа. Качество окраски зависит от рН среды (оптимальной средой является 6,8-7,0). Правильно окрашенные мазки имеют розовый цвет с фиолетовым оттенком. Эритроциты окрашиваются в розо­вый цвет, протоплазма лимфоцитов – в синий, их ядра – в темно-фиолетовый, протоплазма паразитов – в голубой, ку­сочки хроматина – в темно-красный или красный цвет.

Исследуют мазки под микроскопом с иммерсионной сис­темой.