Материалы и оборудование

Для опыта по методу Холодного-Росси: предметные стекла (обезжиренные), нож, пинцеты, сосуд с почвой (влажность - 60% от полной влагоемкости), кристаллизатор, ванночки с препаратодержателями, карболовый эритрозин, фильтровальная бумага, спирт 96⁰ (для фиксации), микроскопы, все необходимое для микроскопирования.

Для опыта по методу Мишустина-Вострова-Петровой: стекла размером 15х16 см, обшитые батистом или холстом (без крахмала); сосуды с компостированной почвой (влажность - 50-60% от полной влагоемкости); нож; пинцеты; кристаллизатор; 0,5%-ный раствор нингидрина в ацетоне или ксилоне; ванночки (или большие чашки Коха или Петри), микроскопы и все необходимое для микроскопирования.

Для опыта по методу целлофановых мембран: пенициллиновые флаконы с обрезанным дном, целлофановая пленка, чашки Петри, почва, вакуумный насос с подсоединенным манометром и патроном для пенициллиновых флаконов с целлофановыми мембранами.

Для опыта по методу инициированного микробного сообщества: почва, чашки Петри диаметром 4 см, шпатели, крахмал, термостат, лупы, микроскопы и все необходимое для микроскопирования.

РАБОТА 4. ВЫЯВЛЕНИЕ РИЗОСФЕРНОЙ И КОРНЕВОЙ (РИЗОПЛАНЫ) МИКРОФЛОРЫ МЕТОДОМ ТЕППЕР

Цель работы - экспериментально подтвердить тот факт, что чем ближе находится почва к корневой системе, тем больше в ней содержится бактерий. Особенно много их на поверхности корня в ризоплане - зоне расположения микроорганизмов непосредственно на корнях растений. Кроме того, необходимо показать, что состав микрофлоры корневой зоны (ризопланы) несколько отличается от микрофлоры ризосферы (зоны, удаленной от корня на расстояние не более 5 мм).

Ход работы

Из выкопанных монолитов почвы с растениями стерильным пинцетом и ножницами отбирают 1 г молодых корней (примерно одного диаметра) с приставшими к ним частицами почвы. Одновременно берут навеску почвы для определения влажности. Корни помещают в колбу со 100 мл стерилизо­ванной водопроводной воды и взбалтывают в течение 2 мин. Стерильным крючком, приготовленным из обычной иглы, корни извлекают из колбы и переносят последовательно во вторую, третью, четвертую, пятую, шестую, седьмую колбы, также содержащие по 100 мл стерильной водопроводной воды. В каждой колбе корни отмывают по 2 мин. Желательно, чтобы в воду последней (седьмой) колбы перед стерилизацией было добавлено 3-5 г песка.

Для анализа качественного состава бактерий ризосферы и ризопланы из каждой колбы отдельной стерильной пипеткой берут по 0,05 мл отмывной воды, наносят на поверхность питательной пластины (МПА) и отдельным шпателем, держа полуоткрытую чашку почти вертикально около пламени го­релки, втирают досуха. Чашки помещают в термостат и выдерживают при температуре 28-30⁰. Спустя 3-5 сут можно проводить анализ.

В результате опыта было обнаружено, что по мере отмывания корней численность бактерий не убывает, а в ряде случаев даже увеличивается. При этом в чашках с посевом из первых отмываний много крупных колоний спорообразующих бактерий. По мере отмывания количество колоний бациллярных форм уменьшается, а число мелкоточечных колоний бактерий рода Psеudоmоnаs, не образующих спор, и колоний бактерий рода Mycobacterium возрастает. Колонии бактерий рода Рsеudоmоnаs обычно прозрачные, колонии микобактерий окрашены в желтый или оранжевый цвет.