Комбинированные методы.

· под соответствующими обозначениями группы крови на тарелку наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I (бесцветная), II (голубая), III (розовая) групп крови (титр 1:32) в объеме 0,1 мл (одна большая капля около 1 см в диаметре);

· наносят две серии сывороток каждой группы;

· шесть капель исследуемой крови (величиной примерно с булавочную головку) по 0,01 мл;

· последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину (тарелку) в шесть точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (соотношение кровь: сыворотка равно 1:10);

· осторожно перемешивают разными палочками (или уголками предметных стекол);

· после перемешивания тарелку периодически покачивают;

· агглютинация начинается в течение первых 10-30 сек., однако наблюдают до 5 минут ввиду возможности поздней агглютинации;

· в те капли, где агглютинация произошла, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия (проверка на ложную агглютинацию).

По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандартным эритроцитам (перекрестный способ):

· кровь берут в сухую пробирку (из вены), центрифугируют или оставляют в покое на 20-30 мин. для разделения на сыворотку и эритроциты;

· на маркированную тарелку пипеткой в 6 ячеек наносят по одной большой капле сыворотки исследуемой крови из пробирки (0,1 мл), а рядом с ними – по одной малой капле (0,01 мл) стандартных эритроцитов I(0), II(А), III(В) групп по две серии;

· дальнейшие мероприятия проводятся аналогично методу с использованием стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Реакция со стандартными сыворотками проводится параллельно.

Оценка результатов (оценивают обе реакции):

· отсутствие агглютинации с эритроцитами I(0)группы и наличие ее с эритроцитами II(А) и III(В) групп – кровь I(0) группы;

· отсутствие агглютинации с эритроцитами I(0) и II(А) групп и наличие ее с эритроцитами III(В) группы – кровь II(А) группы;

· отсутствие агглютинации с эритроцитами I(0) и III(В) групп и наличие ее с эритроцитами II(А) группы – кровь III(В) группы;

· отсутствие агглютинации с эритроцитами всех трех групп – кровь IV(АВ) группы.

С помощью моноклональных антител (цоликлонов):

· нанести цоликлоны анти-А и анти-В на белый планшет по одной большой капле (0,1мл) под соответствующими надписями;

· рядом нанести по одной малой капле (0,01мл) исследуемой крови;

· перемешать и наблюдать за реакцией в течение 2-3 мин.

Оценка результатов:

· отсутствие агглютинации с обеими цоликлонами – кровь I(0)группы;

· наличие агглютинации с цоликлоном анти-А и отсутствие с анти-В – кровь II(А) группы;

· наличие агглютинации с цоликлоном анти-В и отсутствие с анти-А – кровь III(В) группы;

· агглютинация с обеими цоликлонами – кровь IV(АВ) группы.

Рис. 28. Методика определения Рис. 29. Интерпретация данных при определении

группы крови. групп крови.