Определение молекулярной массы белка методом гель-хроматографии

Принцип метода.В значительном диапазоне элюционный объём белка (объём буфера, собранный после нанесения белка на колонку до появления наибольшей концентрации белка в вытекающем буфере (элюате)) является практически линейной функцией логарифма молекулярной массы белка. Пропуская через колонку, заполненную сефадексом или биогелем, исследуемый раствор белка и определяя элюционный объём ( V_э), можно затем по калибровочной кривой найти значение молекулярной массы данного белка.

Для построения калибровочной кривой на колонку наносят различные белки с известной молекулярной массой и для каждого определяют величину элюционного объёма. Затем строят график, откладывая по оси абсцисс логарифм молекулярной массы, а по оси ординат – соответствующие значения V_э.

Измерение объема элюции (V_Э).

Гель-хроматография, как метод определения молекулярной массы, кроме простоты и быстроты, имеет дополнительное преимущество. Не требуется выделять белок в чистом виде, так как примеси других белков не мешают определению. Каждый из них проходит через колонку со свойственной ему скоростью, определяемой молекулярной массой. Это обстоятельство широко используется в энзимологии, когда оказывается возможным определение молекулярной массы даже очень небольшого количества фермента в присутствии других белков, не обладающих аналогичной каталитической активностью.