Генетика микроорганизмов
В 40-х годах XX в. началась новая эра в изучении генетических закономерностей. Генетическими исследованиями занялись не только генетики, но и физики, химики, микробиологи. Объектом исследований стали прокариоты. Долгое время существовало мнение, что микроорганизмы не обладают наследственностью. Микробиологи и генетики по-разному оценивали их с точки зрения целостной единицы. Первые считали организмом, т.е. живой единицей, огромную популяцию клеток, иными словами, бактериальную культуру. Вторые же рассматривали культуру микроорганизмов как сообщество свободно живущих клеток, а колонию — как потомство одной клетки. Информация, по их мнению, должна передаваться от клетки к клетке, а не от культуры. В связи с этим было различным и представление об изменчивости бактерий. Так, по мнению микробиологов, кишечная палочка, обычно культивирующаяся на лактозе, в результате адаптации к условиям существования спустя определенное время после посева может дать рост и на среде с другим сахаром (глюкозой). Генетики же полагают, что способность бактерий расти на глюкозе может развиться и без всякой связи с углеводом при условии, если в культуре будет хотя бы одна клетка, сбраживающая этот сахар, и будет время для ее размножения.
Сталкиваясь с разнообразием клеток в культуре, микробиологи по-разному объясняли это явление. Некоторые утверждали, что бактерии, обладая огромной биологической пластичностью, могут принимать любую биологическую форму и изменять физиологическую функцию. Такое направление получило название плейоморфизм.
Последователи другого направления — мономорфизма — считали, что потомки одной бактерии обладают строго постоянной структурой и функцией и изменчивость является результатом засорения культуры.
По мере более глубокого изучения изменчивости бактерий, их способности адаптироваться к условиям обитания существующие концепций оказывались все более несостоятельными и вытеснялись новыми гипотезами.
Согласно концепции диссоциации, изменчивость обусловливалась превращением одной формы бактерий в другую. Например, шероховатая форма непатогенных пневмококков может диссоциировать в гладкую патогенную: R→S.
В то же время сторонники онтогенной (циклогенной) теории считали, что гладкие и шероховатые формы пневмококков — это лишь различные фазы жизненного цикла одних и тех же бактерий. Все это свидетельствовало об отсутствии четких представлений о причинах изменчивости бактериальных клеток.
Бактерии долго не включались в генетические исследования из-за малых размеров, исключающих возможность достаточно четкого цитологического анализа их, отсутствия конкретных представлений о причинах изменчивости микроорганизмов, а также навыков по гибридологическому анализу.
Датой рождения генетики микроорганизмов следует считать 1943 г., когда появились работы С. Луриа и М. Дельбрюка, которые показали, как следует строить опыты с микроорганизмами, вести учет их признаков, проводить количественный анализ полученных результатов.
Микроорганизмы оказались очень удобным объектом для генетических исследований прежде всего потому, что 1 они являются гаплоидными организмами, у них одна хромосома и она представляет собой молекулу нуклеиновой кислоты, не связанную с белком. Кроме того, 2 микроорганизмы обладают коротким жизненным циклом: некоторые вирусы и бактериофаги живут 20-30 мин, грибы— 1-2 ч. За такой промежуток времени вследствие 3 большой скорости размножения они дают многочисленное потомство. Это позволяет уловить генетические события, происходящие с частотой одно на 1 млн. клеток и реже. И, наконец, 4 микроорганизмам присущи два способа размножения — половой и бесполый.
Микроорганизмы как объект генетических исследований должны обладать рядом достаточно хорошо регистрируемых признаков.Это прежде всего морфологические признаки, т. е. форма и размер колоний, отдельных бактериальных клеток, окраска и характер поверхности (гладкая, шероховатая) колоний и т. д. Эти признаки можно оценить визуально с помощью светового микроскопа или же без специальных приборов и инструментов. Сравнительно несложно учитываются и физиологические (функциональные) признаки бактерий — устойчивость к температуре, свету, химическим веществам, в том числе антибиотикам. Например, фенол или этиловый спирт вызывает у некоторых бактерий образование добавочных жгутиков, а избыток солей кальция подавляет спорообразование. При исключении из среды этих факторов морфологические признаки микроорганизмов восстанавливаются. Нарушение способности синтезировать те или иные необходимые для нормальной жизнедеятельности бактерий вещества лежит в основе биохимических признаков.
Все микроорганизмы по способу питания делятся на две группы: прототрофы и ауксотрофы. Прототрофы — бактерии дикого типа. Они могут жить на минимальной питательной среде, содержащей лишь минеральные соли и углеводы, и нужные им вещества (аминокислоты, витамины и пр.) синтезируют сами. Ауксотрофы — микроорганизмы, потерявшие способность синтезировать определенные вещества. Они живут только на полной питательной среде, содержащей все нужные для них метаболиты.
Для учета биохимических изменений (мутаций) используется метод «отпечатков» и метод «селективных сред». Первый сводится к тому, что на чашку Петри с полной питательной средой высевается исследуемый штамм микроорганизмов и после роста колоний делается отпечаток их на чашки Петри (с минимальной и полной питательной средой) с помощью кусочка бархата, натянутого на диск, одинаковый по диаметру с чашкой. Затем сравнивают колонии, появившиеся на обеих чашках, и отмечают те, которые не дали роста на минимальной среде. Это ауксотрофные мутанты, требующие дальнейшего анализа, чтобы выяснить, какие же вещества они потеряли способность синтезировать. Данный анализ проводится методом селективных сред, т. е. набора сред, содержащих не все метаболиты сразу, а один какой-нибудь (определенный витамин, аминокислоту, азотистое основание). В зависимости от того, на какой среде ауксотрофный мутант дает рост, можно определить присущий ему биохимический дефект.
Дата добавления: 2017-03-12; просмотров: 2001;