Выявление фруктозурии пробой Селиванова.

Метод основан на превращении фруктозы при нагревании и в присутствии соляной кислоты в гидроксиметилфурфурол, который конденсируется с резорцином (0,05% раствор в 20% соляной кислоте, реактив Селиванова), образуя соединение красного цвета.

В 2 пробирки наливают по 1 мл раствора резорцина и добавляют в одну из них 2 мл нормальной, а в другую - патологической мочи. Обе пробирки нагревают в водяной бане до закипания. При наличии в моче фруктозы появляется интенсивное красное окрашивание. Оценку производят в момент закипания; при более длительном нагревании положительную реакцию может дать и глюкоза.

3.3. Энзиматический метод полуколичественного определения глюкозы в моче с помощью тест-полоски "GLUCOPHAN".

Полоски "GLUCOPHAN" имеют поперечную полосу светло-желтого цвета, пропитанную растворами ферментов глюкозооксидазы, пероксидазы и красителя (производного бензидина). Глюкозооксидаза – флавопротеин, простетической группой которого является ФАД. Она катализирует перенос двух атомов водорода с глюкозы на кислород воздуха. Образующийся пероксид водорода расщепляется ферментом пероксидазой, за счет чего происходит окисление красителя. Изменение окраски красителя при его окислении свидетельствует о присутствии в моче глюкозы. Данный метод позволяет определить концентрацию глюкозы в моче от 0,1 до 2%.

Наливают в стаканчик небольшое количество исследуемой мочи. Погружают полоску "GLUCOPHAN" в испытуемую мочу так, чтобы желтая полоса полностью смочилась. Немедленно извлекают полоску из жидкости, выдерживают 2 минуты. Сравнивают изменившуюся окраску цветной полосы с цветной шкалой. При отсутствии глюкозы в моче цвет полоски не меняется. Находят наибольшее совпадение цвета полоски "GLUCOPHAN" с цветом на цветной шкале и ориентировочно определяют концентрацию глюкозы.

Контрольные вопросы

1. Каковы оптимальные условия функционирования панкреатической амилазы?

2. Как можно определить наличие продуктов гидролиза крахмала в пробе?

3. К каким классам относятся ферменты, расщепляющие гликоген до глюкозы?

4. Какие соединения являются продуктами аэробного и анаэробного гликолиза?

5. Почему в организме сохраняется энергетически невыгодный анаэробный гликолиз?

6. Какая функциональная группа молекулы глюкозы обусловливает положительную пробу Троммера?

7. При каких заболеваниях или физиологических состояниях наблюдается глюкозурия?

8. Укажите причины развития фруктозурии.

9. Как объяснить снижение сахара в крови после введения инсулина?

Литература

1. Березов, Т.Т. Биологическая химия. / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин. - М.: ОАО "Издательство "Медицина"", 2007. - 704 с.

2. Биохимия. / Под ред. Е.С. Северина. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2003. - 779 с.

3. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами. / Под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. - 448 с.

4. Зубаиров, Д.М. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. / Д.М. Зубаиров, В.Н. Тимербаев, В.С. Давыдов. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 392 с.

5. Кушманова, О.Б. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. / О.Б. Кушманова, Г.И. Ивченко. - М. - 1983.

6. Ленинджер, А. Основы биохимии / А. Ленинджер. - М., «Мир». - 1985.

7. Марри, Р. Биохимия человека. / Р. Марри, Д. Греннер, П. Мейес, В. Родуэлл. - Т. 1. - М.: Мир, 1993. - 384 с.

8. Марри, Р. Биохимия человека. / Р. Марри, Д. Греннер, П. Мейес, В. Родуэлл. - Т. 2. - М.: Мир, 1993. - 415 с.

9. Николаев, А.Я. Биологическая химия. / А.Я. Николаев. - М.: Медицинское информационное агентство, 2004. - 566 с.

10. Основы аналитической химии. / Под ред. Ю.А. Золотова. - Кн. 2. - М.: Высшая школа, 1996. - 461 с.

11. Справочник. Лабораторные методы исследования в клинике. / Под редакцией проф. В.В. Меньшикова. - М. Медицина. - 1987.

12. Филиппович, Ю.Б. Основы биохимии. / Ю.Б. Филиппович. - М.: Высшая школа, 1993. - 496 с.

13. Филиппович, Ю.Б. Упражнения и задачи по биологической химии. / Ю.Б. Филиппович, Г.А. Севастьянова, Л.И. Щеголева. - М.: Просвещение, 1986. - 144 с.

14. Филиппович, Ю.Б. Практикум по общей биохимии / Ю.Б. Филиппович и др. - Учеб. пособие. - М.: Просвещение, 1982.

15. Эллиот В, Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биология. / В. Эллиот, Д. Эллиот. - М. - 1999.