Определение интенсивности плодоношения и спорообразования грибов

Интенсивность плодоношения (спорообразования) грибов характеризует их репродуктивную способность, играет важную роль в распространении и реализации их жизненной стратегии. У фитопатогенных грибов интенсивное спорообразование обусловливает высокий инфекционный потенциал возбудителей заболеваний.

Интенсивность спорообразования (т.е. увеличение числа спор) при росте гриба на плотной среде определяют с помощью счетной камеры или в нескольких полях зрения микроскопа по количеству спор в определенном объеме взвеси.

Счетная камера представляет собой толстое предметное стекло, на котором вышлифована пластинка, поверхность которой обычно на 0,1 мм ниже поверхности всего стекла. На такой пластинке выгравирована система взаимоперпендикулярных линий, расстояние между которыми равно 50 μ. Квадраты, образуемые пересечением таких линий, имеют сторону, равную также 50 μ, или же, что одно и то же, 1/20 мм. Объем такой «жидкой призмы» равен 1/4000 мм³ (1/20 ×0,1 ×1/20 мм³). Необходимо помнить, что 1 мм³ в 4000, а 1 см³ – 4000000 раз больше объема одной призмы. Если жидкость представляет собой взвесь спор, то исходя из вычисленных единиц объема, можно подсчитать, сколько находится спор или конидий в любой единице жидкости, а потом и во всей жидкости, если ее объем установлен. Иногда для этих целей пользуются камерами Горяева, Тома, Фукс-Розенталя, Нейбауера, сеткой Предтеченского и т.д. В камере Тома и сетке Предтеченского очерченная на пластинке площадь равна 1 мм². На каждой камере имеется ее цифровое значение, и на это необходимо обращать внимание.

Практически количество конидий или отдельных клеток вычисляют по формуле:

X = а × в × 4000, (3)

где X – количество искомых клеток в 1 мм³;

а – количество клеток в определенном объеме камеры;

в – количество сосчитанных квадратов.

Если пересчет ведется на 1 см³ , то умножают на 4000000. Подсчет проводят или в каждом квадрате, или же в квадратах, расположенных по диагонали. Если подсчет ведут в очень разбавленных смесях, то за единицу поверхности берут не только один квадрат, а всю камеру. Для большей точности подсчитывают конидии не в одной, а в нескольких каплях исследуемой взвеси. Результаты обрабатывают статистически. Для того, чтобы определить количество спор (конидий), которые гриб образует на единицу площади спороносящей поверхности, с помощью пробочного сверла или скальпеля вырезают определенный участок ткани растения и смывают с него споры 1 мл воды.

(4)

где I – интенсивность спорообразования, шт / см²;

N – среднее количество спор в малом квадрате счетной камеры, шт;

S – площадь вырезанной спороносящей поверхности, см²;

L – объем воды, которой смыты споры, мл;

V – объем малого квадрата камеры, мл.

При поверхностном или погруженном культивировании в жидкой питательной среде интенсивность спорообразования определяют по количеству конидий в определенном объеме культуральной жидкости. Пробу культуры, помещенную в жидкую среду, встряхивают на аппарате в течение 15-30 мин и центрифугируют. Время осаждения спор зависит от вида гриба и определяется экспериментально. Из определенной навески осадка спор готовят взвесь и в счетной камере подсчитывают число спор в единице объема.

Интенсивность спорообразования определяют по количеству пустул, клейстотециев, перитециев, апотециев, ложе, пикнид – на 1 см² пораженной ткани. Определяют в 3-х предварительно ограниченных местах на 10-ти очажно пораженных органах (например, клейстотеции возбудителей мучнистой росы в 3 точках листа на 10 листьях) количество плодовых тел на единицу поверхности по формуле:

(5)

где N – количество пустул, клейстотециев, перитециев, апотециев, ложе, пикнид на 1 см², шт / см²;

Σ n – общее количество пустул, клейстотециев, перитециев, апотециев, ложе, пикнид, шт;

Σs – общая площадь, на которой проведен учет, см² .

Для гифальных грибов интенсивность спорообразованияопределяют по количеству спор на 1 см² спороносящей поверхности.