Вирусологическое исследование

Исследование включает культивирование на культуре клеток и идентификация вируса, постановка биопробы. Для культивирования вирусов используют первично трипсинизированную культуру клеток или используют перевиваемые культуры клеток, обладающих бесконечной потенцией роста in vitro (FHM – из тканей хвостового стебля жирноголового гольяна, RIG₂ – из гонад радужной форели, EPC – из клеток оспенных разростов на коже карпа). Перевиваемые культуры выбирают исходя из предполагаемой природы вируса. Первично трипсинизированную культуру клеток готовят из гонад самок рыб II-й и III-й стадии зрелости по шкале Киселевича. Для трипсинизации используют 0,5 %-ный раствор трипсина вместо 0,25 %, так как работа ведется при комнатной температуре. Степень поражения клеточного монослоя выражают в крестах (25 % – +; 50 % – ++; 75 % – +++; 100 % – ++++).

Для идентификации вирусов используют несколько взаимодополняющих методов: электронную микроскопию, изучение физико-химических свойств вируса, обнаружение характерных морфологических изменений в зараженных клетках, серологические методы (РН, РП, РСК и др.).

Биологическая проба

Биопроба ставится для окончательного установления диагноза. При постановке ее с целью определения патогенности возбудителя применяют чистые культуры бактерий, вирусов, грибов. Кроме того, применяют нативные суспензии и взвеси, приготовленные из различных органов и тканей, естественно больных или подозреваемых в заражении рыб. Биопробу ставят в аквариумах, ваннах или бассейнах, создавая в них оптимальные условия для жизни рыб и размножения возбудителей болезни. Для биопробы берут заведомо здоровую рыбу того же вида и возраста. Наблюдения ведут ежедневно, учитывая количество погибших рыб, клинические изменения и характер патологоанатомических изменений. Длительность опыта определяется с учетом инкубационного периода.

Заражение рыб проводят следующими способами: per os; подкожно; внутримышечно; внутрибрюшинно; контактным методом; орошением жабр или выдерживанием рыб в воде, содержащей возбудителя; скарифицированием кожи.

Дозу вводимого патологического материала в каждом конкретном случае определяют титрованием на восприимчивых рыбах.

Биопроба считается положительной, если у 80 % зараженных рыб проявляется весь комплекс клинических признаков и патологоанатомических изменений болезни и погибает не менее 50 % больных рыб, при выделении от погибших рыб исходных возбудителей.

Болезни инфекционной этиологии

Вирозы

Весенняя виремия карпов (ВВК, краснуха, инфекционная водянка, геморрагическая септицемия) – инфекционная вирусная болезнь рыб, характеризующаяся нарушением координации движения, появлением отеков в различных частях тела, ерошением чешуи, экзофтальмией, геморрагиями в кожных покровах у основания грудных и брюшных плавников.

Этиология. Возбудитель болезни РНК–геномный вирус из сем. Rabdoviridae, пулевидной формы, размером 25–85 нм (70–125 нм).

Эпизоотология.Болеют карпы 1–2-летки, белый амур, белый и пестрый толстолобик ранней весной при температуре воды 10–14 °С. Летальность может достигать 45 %.

Симптомы и течение. Инкубационный период 7–30 дней. Больная рыба плавает по кругу или штопорообразно. Наблюдается ерошение чешуи, вздутие брюшка, точечные кровоизлияния и покраснение кожи у основания грудных и брюшных плавников, потемнение кожи, анемия жабр, серповидные кровоизлияния в глазном яблоке. Асцит (скопление в брюшной полости кровянистого экссудата).

Диагноз. Учитывают сезонность, характерные симптомы болезни, проводится вирусологическое исследование и ставится биопроба.

Дифференциальный диагноз. Следует дифференцировать от эритродерматита карпов, аэромоноза, псевдомоноза.

При эритродерматите карпов выделяют возбудителя Aeromonas salmonicida. При аэромонозе, помимо геморрагического диатеза, на коже появляются язвы, отмечается восковидный некроз скелетных мышц, и бактериоскопией выделяют аэромонад. При псевдомонозе отмечают потемнение и зеленоватый оттенок, а также ерошение чешуи. Печень с кровоизлияниями. Бакисследованием выделяют псевдомонад.

Профилактика и меры борьбы. При возникновении ВВК на хозяйство накладывают карантин и проводят весь комплекс противоэпизоотических мероприятий, предусмотренных ветеринарным законодательством по ликвидации заразных болезней. Рыбу с неблагополучных прудов, имеющую товарный вид, реализуют в торговую сеть. Неблагополучный пруд выводят на летование. Ложе пруда дезинфицируют негашеной (25–30 ц/га) или хлорной (3–5 ц/га) известью, перепахивают и засевают бобовыми травами.

Карантин снимают через 1 год после последнего случая клинического проявления болезни при условии получения отрицательного результата вирусологических исследований рыб из неблагополучных прудов.

Оспа карпа – характеризуется разрастанием эпителиальной ткани кожи с образованием на теле эпителиом матово-голубого цвета. Заболевание встречается как в естественных водоемах, так и в прудовых хозяйствах.

Этиология. Возбудитель болезни – вирус ДНК-геномный из семейства Herpesviridae. Его вирионы округлой формы диаметром до 110 нм, размножаются в ядре эпителиальных клеток.

Эпизоотология.Поражаются, главным образом, карпы, сазаны и их гибриды, разводимые в прудах. Наиболее часто поражаются двухлетки. Молодь и годовики обычно оспой не болеют. Заболевание проявляется летом и осенью. К осени – количество больной рыбы возрастает. В зимнее время этот показатель сохраняется на одном уровне, а весной среди рыб неблагополучного стада вновь увеличивается число больных особей. Гибель рыб наблюдается редко. При спонтанном течении заболевания, без принятия необходимых мер, тяжесть болезни увеличивается из года в год. Этому также способствует антисанитарное состояние прудов (зарастание, заболачивание, загрязнение), снижение их проточности, слабая селекционная работа и подбор производителей для нерестовой кампании, недостаточное количество и несбалансированность кормов.

Источником заражения служат больные рыбы. Способствующий фактор – недостаток в воде и почве кальция.

Заболевание распространяется при завозе в благополучные хозяйства молоди рыб из неблагополучных хозяйств.

Симптомы и течение. Вначале у рыб появляются небольшие одиночные беловатые пятна на кожных покровах туловища, хвоста, плавников. Затем, вследствие гиперплазии клеток эпидермиса, кожа в пораженных местах утолщается и образуются плоские эпителиомы, которые возвышаются над поверхностью остального кожного покрова. При тяжелой форме болезни отдельные опухоли сливаются, образуя сплошной слой толщиной 2–4 мм, покрывающий всю поверхность тела. В начальной стадии болезни эпителиомы имеют гладкую блестящую поверхность и мягкую консистенцию.

При хроническом течении болезни поверхность оспенных образований становится шероховатой, уплотняется и приобретает твердую консистенцию, напоминающую хрящевую ткань. При дальнейшем развитии в процесс вовлекается и подлежащая мышечная ткань, которая теряет упругость и инфильтрируется жидкостью. Кости скелета размягчаются, происходит его деформация.

Диагноз ставят на основании клинических признаков.

Дифференциальный диагноз. Оспу надо дифференцировать от эктопаразитарных болезней (триходиноз, хилодонеллез, ихтиофтириоз), при которых на кожных покровах появляется слизистый голубовато-серый налет. Однако, в отличие от оспенных поражений, он имеет не очаговый, а разлитой характер и покрывает почти все тело. При микроскопии соскобов с кожи при эктопаразитозах обнаруживают паразитов.

Профилактика и меры борьбы. На неблагополучные хозяйства накладывают ограничения. Запрещается вывоз рыб в другие водоемы. Сильно пораженных оспой рыб к употреблению в пищу людям не допускают. Ее проваривают и направляют в корм животным. Проводят комплекс ветеринарно-санитарных и рыбоводно-мелиоративных мероприятий, направленных на улучшение условий среды обитания рыб. Действенным методом ликвидации и профилактики заболевания является периодическое летование прудов. При недостатке в воде и почве кальция пруды систематически известкуют, а в корм рыбы включают дополнительно мел (до 5 % суточного рациона). В кормовую смесь добавляют витаминсодержащие компоненты: зеленую пасту из луговой и водной растительности (до 20 % к рациону), гидролизные дрожжи (до 3–4 % рациона). Улучшают селекционно-племенную работу, исключающую инбридинг и позволяющую получать устойчивое к данному заболеванию потомство.

Бактериозы

Аэромоноз (краснуха, геморрагическая септицемия, инфекционная брюшная водянка) – инфекционная болезнь карповых рыб, характеризующаяся воспалением кожного покрова, ерошением чешуи и пучеглазием.

Этиология. Возбудитель болезни – Aeromonas hydrophila, подвижная грамотрицательная палочка, спор и капсул не образует.

Эпизоотология. Болеют карпы, сазаны в возрасте от сеголетков до производителей. Заражение происходит алиментарно, через поврежденную кожу и жабры.

Симптомы и течение. Течение болезни острое, подострое и хроническое. Отмечается гиперемия кожного покрова с очаговыми кровоизлияниями на ней, ерошение чешуи, пучеглазие, асцит (скопление в брюшной полости кровянистой или студнеобразной жидкости со зловонным запахом). При хроническом течении на коже – язвы и сине–фиолетовые рубцы.

Диагноз ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов бактериологического исследования (выделение вирулентной культуры возбудителя). Ставится биопроба на карпах или мышах).

Лечение.Энротим-10 % в дозе 10 кг/т комбикорма 10 дней подряд; с профилактической целью – 5 кг/т корма. При необходимости лечебный курс повторяют 2 – 3 раза с интервалом 10 – 15 дней. Применяют также ванны с левомицетином (0,3 г/л, экспозиция 12 часов). Производителям и ремонтному молодняку левомицетин вводят внутрибрюшинно (0,02–0,03 г/кг) – двукратно с интервалом 2–4 дня. Всем возрастным группам показан фуразолидон из расчета 6 г/10 кг корма в течение 10–ти суток с интервалом 2 дня. С профилактической целью препарат вводят производителям в дозе 0,4 г, двухлеткам и сеголеткам – 0,3 г на 10 кг корма. Кормление антимикробными препаратами производят с начала сезона несколько раз с интервалом в 2–3 недели.

Профилактика и меры борьбы. На неблагополучное хозяйство накладывают карантин. Трупы погибших рыб обеззараживают 20 %–м раствором хлорной извести и зарывают в землю на глубину 1,5 м вдали от водоема.

Псевдомоноз карпов (краснухоподобное заболевание карпов и толстолобиков) – инфекционная болезнь рыб, характеризующаяся развитием общего септического процесса, поражениями на коже и развитием водянки.

Этиология. Возбудителем болезни являются бактерии из рода Pseudomonas, подвижные, грамотрицательные монотрихи, в крови образуют капсулу.

Эпизоотология. Болеют сеголетки карпа, карася и толстолобика.

Заражение происходит контактным путем, через поврежденную кожу, жабры, а также алиментарно.

Возникновению и обострению заболевания способствуют нарушение ветеринарно-санитарных и зоогигиенических требований, предъявляемых к условиям зимовки рыб.

Симптомы и течение. Отмечают острое и подострое течение болезни. Отмечают эритродерматит, на коже и плавниках больных рыб появляются очаговые кровоизлияния, возникает пучеглазие и ерошение чешуи. Асцит (скопление в брюшной полости желтовато-зеленоватого экссудата).

Диагноз – с учетом симптоматики. Обязательно проводят бактериологическое исследование и ставят биопробу.

Дифференциальный диагноз. Дифференцировать надо от аэромоноза, эритродерматита карпов.

Лечение.Для предупреждения осложнения эктопаразитарными заболеваниями, а также уменьшения численности возбудителя болезни рыбу рекомендуется обрабатывать антипаразитарными препаратами (бриллиантовый зеленый, малахитовый зеленый, фиолетовый К) в дозе 0,05–0,1 г/м³ воды при увеличении проточности.

Профилактика и меры борьбы. Хозяйство объявляется неблагополучным. Накладывают ограничения на перевозки рыбопосадочного материала. Проводится тщательная очистка бассейнов от ила, фекалий, трупов рыб. Зимовальные бассейны дезинфицируют 10 %–ным раствором хлорной извести, рыбоводный инвентарь обрабатывают 4 %–ным раствором формалина. Пересаживают больных рыб в чистые продезинфицированные пруды или бассейны с оптимальными условиями содержания. Пруды и бассейны, освобожденные от рыб, подвергают очистке и дезинфекции. За неблагополучными прудами и бассейнами закрепляют отдельный рыбоводный инвентарь, который постоянно обеззараживают. Ежемесячно проводят бактериологический контроль за состоянием содержащейся рыбы. При отсутствии клинических признаков болезни в течение 3–х лет и при отрицательных показателях бакисследований хозяйство считается оздоровленным и с него снимают ограничения.

Микозы

Бранхиомикоз(жаберная гниль) – остро протекающая микозная болезнь рыб различных видов, характеризующаяся поражением кровеносных сосудов жаберного аппарата и некротическим распадом ткани жаберных лепестков.

Этиология. Возбудитель – гриб Branchiomyces sanguinis вызывает заболевание у карпа, сазана, их гибридов, карася, пескаря. Br. demigrans – у щуки. У линя могут паразитировать оба вида. Br. sanguinis – специфический паразит крови. Гифы мицелия сильно разветвлены, толщина 8–12, длина 10–15 мкм, локализуются только в стенках сосудов жаберных лепестков и респираторных складок. Br. demigrans – может проникать из кровеносных сосудов жабр в соединительную ткань и там разрастаться.

Эпизоотология. Заболевание отмечается в рыбоводных прудах при нарушении санитарно-биологических условий выращивания рыбы. Эпизоотии возникают чаще всего летом, при температуре 22–25 ^°С.

Восприимчивы карпы, сазаны, их гибриды, караси, пескари, лини щуки. Известны случаи заражения радужной форели, сома. Болеют все возрастные группы рыб, однако более восприимчивы рыбы в возрасте 1–2 лет, среди которых заболевание распространяется до 70 %. Источники заболевания – больные рыбы и трупы рыб. Заражение происходит через инфицированные ложа прудов, воду. Возникновению и распространению болезни способствуют неполноценное кормление рыб, малая проточность прудов, чрезмерное загрязнение. Гибель сеголеток и годовиков достигает 50–70 %.

Симптомы и течение. Заболевание развивается в течение 5–12-и дней. В начале заболевания на жаберных лепестках появляются точечные кровоизлияния. Затем гифы грибов, разрастаясь, закупоривают кровеносные сосуды и вызывают эмболию. Возникает мозаичность в окрашивании жабр и некроз участков, лишенных кровоснабжения. Происходит отмирание лепестков и образование зубчатого края жабр. Больная рыба не кормится, не реагирует на раздражители, подплывает к поверхности воды, но не заглатывает воздух, как при заморе. Лежит на боку и в таком положении погибает. У выживших рыб болезнь приобретает подострое или хроническое течение. Жабры частично разрушены, регенерация длится год или более. Наблюдается нейтрофилия с 2,5 % (норма) до 24 %, моноцитоз до 8,5 % (норма 0,5 %), лимфоцитопения с 95 % до 64 %, эритропения с 2,5 до 0,8 млн. в 1 мкм³.

Диагноз ставится комплексно. Приоритетным является микроскопия жабр рыб, а также микологическое лабораторное исследование (при этом берут участки жаберной ткани от трупов рыб).

Дифференциальный диагноз. Необходимо дифференцировать от вирусного бранхионекроза рыб (ВБР), жаберной формы криптобиоза, дактилогироза. При ВБР в сосудах жабр не обнаруживается гифов грибов, а при патологоанатомическом вскрытии отмечаются кровоизлияния в миокарде, перикарде, мозговых оболочках и слизистой глаз.

При криптобиозе и дактилогирозе в соскобах с жабр обнаруживают соответствующих паразитов.

Лечение.Используют фунгицидный антибиотик грицин из расчета 0,05 г/кг корма 3 дня подряд.

Профилактика и меры борьбы. На хозяйство накладывают карантин, немедленно усиливают проточность воды в неблагополучных прудах, обогащают ее кислородом при помощи аэраторов, прекращают кормление рыбы и стабилизируют среду путем известкования воды негашеной известью из расчета 150 кг/га 1 раз в месяц с мая, для повышения рН до 8. Проводят отлов больной и сбор трупов погибшей рыбы. Карпов, не утративших товарный вид, реализуют в торговую сеть. Прекращают кормление рыбы и удобрение прудов. В воду вносят известковое молоко, добиваясь рН 8,0–8,5 (150–200 кг/га), медный купорос 8–12 кг/га.

Карантин с хозяйства снимают после полного прекращения заболевания и выполнения всех противоэпизоотических мероприятий, но не ранее, чем через год.

Сапролегниоз рыб (дерматомикоз) и икры (биссус) – микозные болезни пресноводных рыб различных видов, характеризующиеся поражением кожи, плавников, жаберного аппарата и икры во время заводской инкубации.

Этиология. Возбудитель болезни – гриб из рода Saprolegnia. При этом выделяют S. parasitica, S. mixta, S. ferax, S. monica. Грибы имеют разветвленные и неразветвленные гифы, которые сплетаются и образуют мицелий. Толщина гифов 20–75 мкм, они окружены оболочкой и заполнены протоплазмой, содержащей большое количество ядер. Терминальная часть расширена и образует спорангий, в котором находятся зооспоры. После созревания спорангий лопается, и споры рассеиваются во внешнюю среду. Возможно размножение и половым путем (оогонии и антеридии).

Эпизоотология.Сапролегниозом болеют прудовые рыбы всех возрастов, но чаще сеголетки во время зимовки. Заболевание чаще регистрируют у карповых и лососевых рыб при индустриальных технологиях выращивания. Сопутствующие факторы: истощение рыб, ухудшение условий содержания, травматизация. Сапролегниоз часто может быть секундарным заболеванием при фурункулезе лососевых, аэромонозе карпов, других заразных заболеваниях. Кроме рыб, сапролегниозом поражается и икра.

Симптомы и течение. На коже, плавниках и жабрах появляются белые тонкие нити, перпендикулярно отходящие от тела рыб. В местах поселения гриба ясно виден ватообразный налет, состоящий из мицелия. Гифы прорастают в подлежащие слои, вызывая некроз тканей и общий микотоксикоз. Ослабленные особи погибают.

Диагноз ставится комплексно. Из лабораторных исследований проводят микроскопию соскобов и микологическое исследование. Культура хорошо растет на МПА, агаре Чапека в виде больших белых пушистых колоний, состоящих из свободных, упругих не септированных гиф.

Дифференциальный диагноз. Заболевание необходимо дифференцировать от болезни Штаффа, при которой рост гиф гриба отмечается из носовых пазух и на голове.

Лечение. На начальных стадиях рекомендуют ванны из 5 %-го раствора натрия хлорида с экспозицией 5 минут, растворов малахитового зеленого – 1:200000 (экспозиция 1 час), метиленового синего – 50 мг/л (экспозиция 12–16 часов), основного ярко-зеленого в зимовальных прудах (0,15–0,2 мг/л).

При сапролегниозе икры: метиленовый синий – в инкубационном аппарате Вейса, 0,001 г/л – 30 минут, формалин 0,5 %-й раствор – 15 минут.

Профилактика и меры борьбы. Применяется весь комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий, контроль за газовым и солевым режимами. Проводят дезинфекцию ложа пруда хлорной известью (3–5 ц/га) и негашеной известью (25–30 ц/га).