СРЕДСТВА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ, ТЕРАПИИ И ДИАГНОСТИКИ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ 2 глава

Поступивший в лабораторию неконсервированный материал можно хранить при 4 ºС 1...2сут; консервированный в 50%-м ра­створе глицерина (кусочки органов) — несколько недель; для длительного хранения материал замораживают при —15...—20 °С.

Кровь для серологических исследований у крупного рогатого скота, овец, лошадей берут из яремной вены в стерильные бак­териологические пробирки в количестве 10... 15 мл, у свиней — из хвостовой, передней краниальной вен или глазного синуса, у птиц — из подкрыльцовой вен, у кроликов — из краевой уш­ной вены. Пробирки с кровью необходимо выдержать до фор­мирования сгустка в тепле (1,5...2 ч), затем для отделения от стенок пробирки обвести сгусток стеклянной чистой палочкой или спицей. Для отстаивания сыворотки пробирки с кровью по­мещают в холодильник при 4...6 °С на 18...20 ч. После ретракции сгустка сыворотку крови переливают в серологические пробир­ки с резиновыми пробками. При необходимости сыворотку крови консервируют, добавляя в пробирку несколько крупинок борной кислоты, тиомерсал (конечное разведение 1:10 000), или замораживают.

Принципиальная схема микробиологического исследования. Ди­агностика инфекционных болезней включает в себя комплекс исследований: эпизоотологические, клинические, патологоана­томические, микробиологические. При важности каждого из них и ценности именно комплексного подхода микробиологическое исследование особенно важно, поскольку с его помощью либо непосредственно обнаруживают этиологический (причинный) агент болезни, либо косвенными специфическими иммунологи­ческими методами доказывают его присутствие.

Микробиологическое исследование в принципе состоит из следующих этапов.

1. Обнаружение возбудителя непосредственно в исследуемом
материале без изоляции в виде чистой культуры на питательных
средах. На этом этапе применяют разные методы.

Неиммунологические методы включают в себя: а) выявление возбудителя путем микроскопического исследования окрашен­ных (по Граму и т. д.) мазков-отпечатков из органов и тканей; б) обнаружение при помощи генетических методов (генные зон­ды, ПЦР) нуклеиновых кислот возбудителя.

Иммунологические методы заключаются в выявлении антиге­нов возбудителя с помощью различных серологических реакций (РП, РДП, МФА, ИФА, РИГА и т.д.).

2. Обнаружение возбудителя (его токсинов) в биопробе (зара­жают исследуемым материалом чувствительных лабораторных животных).

3. Выделение культуры возбудителя из исследуемого материа­ла путем посева на питательные среды.

4. Идентификация выделенной культуры микроорганизмов по совокупности морфологических, тинкториальных, культуральных, ферментативных и патогенных свойств. При этом широко используют серологические (РА, РП, РДП, ИФА и т.д.), а в слу­чае необходимости генетические методы идентификации изоли­рованных микроорганизмов.

5. Серологическая (ретроспективная) диагностика заключа­ется в том, что при помощи различных серологических реакций (РА, РСК, ИФА и т. д.) в сыворотке крови исследуемых живот­ных обнаруживают специфические следы пребывания возбуди­теля — антитела. Серолбгические реакции наиболее широко применяют при диагностике хронически протекающих бактери­озов.

6. Аллергическое исследование в отличие от перечисленных выше методов проводят непосредственно на животных в хозяй­стве. При помощи диагностических аллергенов у животных вы­являют состояние гиперчувствительности замедленного типа. Аллергическую пробу в основном применяют для иммунологи­ческой диагностики хронических бактериозов.

Изложенная схема отражает возможные, но не обязательные направления микробиологических исследований. При каждой конкретной инфекции схему исследования определяют особен­ности биологии возбудителя и инфекционного процесса.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Освоить методику взятия материала из трупа животного (кролик, морская свинка).

2. Приготовить консервирующие смеси различного типа (гли­церин, физиологический раствор, лед и поваренная соль) и про­вести консервирование материалов различного типа.

3. Освоить технику взятия крови у кролика и получения сыво­ротки крови.

Контрольные вопросы

1.Какой материал берут прижизненно и какой посмертно у животных для мик­робиологического исследования?

2.Какие методы консервирования материала применяют для микробиологи­ческого исследования?

3.Какова схема микробиологического исследования?

Раздел III

ЧАСТНАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ

Тема 22

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА СТАФИЛОКОККОЗОВ И СТРЕПТОКОККОЗОВ. БИОПРЕПАРАТЫ

Цель занятия. Ознакомить студентов с этапами лабораторной диагностики, основными свойствами возбудителей стафилоккозов, стрептококкозов и биопрепаратами.

Оборудование и материалы. Культуры S. aureus и S. saprophytics на МПА, кровяном МПА, в МПБ, результаты тестов по опреде­лению патогенных свойств стафилококков: ферментация манни-та, плазмокоагулазная, гемолитическая, лецитиназная, ДНК-азная, желатиназная активность, культуры S. pneumoniae, S. agalactiae (или S. pyogenes) на глюкозо-сывороточном МПА, МПБ, на средах Гисса с углеводами, пипетки Пастера; стериль­ные МПБ и кровяной МПА, красители для окраски по Граму и на капсулы, биопрепараты.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Стафилококкозы. Бактериальные инфекции, вызываемые па­тогенными стафилококками, характеризующиеся преимуще­ственно гноеродными процессами различной локализации. Про­являются в виде абсцессов, флегмон, маститов, метритов, пнев­моний, сепсиса. Токсигенные штаммы стафилококков могут вы­зывать пищевые отравления у людей.

Возбудитель стафилококкозов: в основном штаммы S. aureus, реже S. epidermidis и некоторые другие виды рода Staphylococcus, семейства Micrococcaceae.

Лабораторная диагностика стафилококкозов основана на ре­зультатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии, выделение чистой культуры посе­вом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологичес­ким, а также токсигенным признакам (методом биопробы).

Материал для исследования. Для прижизненной диагностики берут раневой экссудат стерильными ватными тампонами, содержимое абсцессов отбирают стерильным шприцем, при масти­тах материалом служит секрет вымени.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки окра­шивают по Граму и на капсулу, микроскопируют. Клетки стафи­лококков грамположительные, сферической формы, диаметром 0,5... 1 мкм, располагаются в виде скоплений неправильной фор­мы, а также единично, парами и цепочками из трех-четырех кле­ток (рис. 72), спор нет, вирулентные штаммы могут образовывать капсулу.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Стафило­кокки — факультативные анаэробы, температурный оптимум 30...37 ºС, рН 7,2...7,4, к питательным средам неприхотливы, мо­гут расти при повышенном содержании хлорида натрия. Иссле­дуемый материал высевают на МПА, в МПБ, посевы культивиру­ют в условиях обычной атмосферы. При загрязнении материала посторонней микрофлорой используют питательные среды с се­лективными свойствами: солевые МПА, МПБ (8...10% хлорида натрия), желточно-солевой агар (ЖСА), 3,5%-й МПА с добавле­нием 3 мл 0,1%-го раствора кристаллвиолета (на этой среде пато­генные стафилококки образуют колонии фиолетового или оран­жевого цвета). Широко используют посев исходного материала на кровяной МПА.

На плотных средах через 18...24ч инкубирования вырастают колонии правильной круглой формы, выпуклые, с гладкой по­верхностью, ровными краями, диаметром 2...7мм, непрозрач­ные. Цвет колоний зависит от типа вырабатываемого пигмента. S. aureus синтезирует золотистый и белый пигмент. На кровяном МПА вирулентные штаммы обычно растут, формируя широкую зону бета-гемолиза (рис. 73). На ЖСА вокруг колоний стафило­кокков, обладающих лецитиназной активностью, образуются зоны помутнения с перламутровым оттенком. В МПБ рост ста­филококков сопровождается интенсивным помутнением среды и образованием значительного осадка.

Из культур, выросших на питательных средах, готовят мазки, окрашивают по Граму и микроскопируют. При обнаружении бактерий с типичными для стафилококков культурально-морф-логическими признаками приступают к изучению свойств, прямо или косвенно свидетельствующих о патогенности выделенного стафилококка.

Патогенные стафилококки в отличие от непатогенных образу­ют капсулу (S. aureus), выделяет гемолизин, фибринолизин (стафилокиназу), гиалуронидазу, плазмокоагулазу, желатиназу, ДНК-азу, лецитиназу, ферментируют маннит. Методы выявле­ния этих факторов патогенности изложены в теме 13. Важней­шим из перечисленных факторов считают плазмокоагулазу: у 90...95 % плазмокоагулирующих стафилококков выражена спо­собность продуцировать энтеротоксин.

Протеин А также рассматривают как фактор патогенности стафилококков. Этот белок, находясь в составе клеточной стен­ки, связывает Fc-фрагменты IgG, что способствует снижению эффективности фагоцитоза. Для выявления протеина А смеши­вают суспензию эритроцитов, сенсибилизированных IgG, и клет­ки исследуемой культуры стафилококка. При наличии белка А стафилококки соединяются с иммуноглобулинами и вызывают агглютинацию эритроцитов.

Биопроба. Заражают лабораторных животных для подтвержде­ния токсигенных свойств выделенного стафилококка.

Летальный токсин выявляют внутривенным введением кроли­ку фильтрата бульонной культуры 0,75 мл на 1 кг массы.

Некротоксин обнаруживают внутрикожной пробой. Готовят суспензию суточной культуры в физиологическом растворе с концентрацией клеток 4,2 • 10⁹/мл и 1 *10⁹/мл. Каждое разведе­ние культуры по 0,1 мл вводят внутрикожно кролику, предвари­тельно удалив шерстный покров на месте инъекции. Результаты учитывают ежедневно на протяжении 4...5сут. В положительных случаях развивается некроз кожи.

Энтеротоксин продуцируют токсигенные штаммы. Пробу на энтеротоксин ставят при отравлениях. Культуру стафилококка выращивают на специальной питательной среде (пептон, хлорид кальция, хлорид магния, дигидрофосфат калия, 0,8 % агар-агара, рН 7,2), в атмосфере, содержащей 20 % оксида углерода (IV), в течение трех суток. Затем культуру стерилизуют фильтрованием, 10...15 мл фильтрата смешивают с равным объемом молока и скармливают 4...8-недельным котятам. При наличии энтеротоксина через 1..2ч у животных возникают симптомы гастроэнтери­та и рвота.

Стрептококкозы. Инфекционные болезни, вызываемые бакте­риями рода Streptococcus, к которому относят 29 видов. Наиболь­шее значение в патологии сельскохозяйственных животных име­ют следующие виды: S. pneumoniae — возбудитель стрептококко­вой (диплококковой) септицемии молодняка сельскохозяйствен­ных животных; S. equi, включающий в себя три подвида: S. equi subsp. equi — возбудитель мыта лошадей; S. equi subsp. equisimillis и S. equi subsp. zooepidemicus, который вызывает септические инфек­ции у других видов животных; S. agalactiae и S. dysagalactiae — этиологические агенты маститов крупного рогатого скота; S. pyogenes — возбудитель ряда заболеваний, преимущественно человека. Многие стрептококки, патогенные для животных, пока идентифицированы на уровне серологической группы и не полу­чили видовых наименований.

Лабораторная диагностика стрептококкозов основана на ре­зультатах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой микроскопии, выделение чистой культуры посе­вом на питательные среды или методом биопробы, идентифика­цию возбудителя по культурально-морфологическим, фермента­тивным, серологическим и патогенным признакам (методом биопробы).

Материал для исследования. При подозрении на мыт прижиз­ненно берут носовые истечения, содержимое абсцессов лимфа­тических узлов (путем пункции), для посмертной диагностики — кровь из сердца, части печени, селезенки, легких. При стрепто­кокковых маститах исследуют молоко, при подозрении на септи­ческие стрептококкозы (диплококковая инфекция и др.) — кровь из сердца, селезенку, печень, костный мозг, носовые истечения.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Мазки окра­шивают по Граму и на капсулу, микроскопируют. Все стрепто­кокки представляют собой сферические или овальные грамполо-жительные клетки диаметром 0,5...1,25 мкм, без спор и жгутиков, с тенденцией к образованию цепочек различной длины (рис. 74, 75). Морфология стрептококков некоторых видов в препаратах из патологического материала несколько отличается. У S. pneumoniae клетки обычно парные, окруженные капсулой, концевые части клеток слегка удлинены, поэтому данный стреп­тококк ранее называли ланцетовидным диплококком. Клетки S. pneumoniae также могут располагаться единично и короткими цепочками. S. equi в мазках из гноя обнаруживают в виде длин­ных цепочек, причем клетки в цепочке как бы сплющены в гори­зонтальной плоскости, образуют капсулу; в мазках из культуры клетки S. equi чаще располагаются короткими це­почками, единично, парами. S. agalactiae и S. pyogenes в пре­паратах из материала чаще

обнаруживают в виде цепочек.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Стреп­тококки — факультативные ана­эробы, температурный опти­мум 37 °С (диапазон 25... 45 °С). На общепринятых пи­тательных средах растут плохо, обычно используют обогащенные среды: МПБ с 1 % глюкозы и 10 % инактивированной сыворотки крови лошади, МПА с 1 % глюкозы и 5 % крови барана или кролика. Для выделения культуры возбуди­теля исследуемый материал высевают на указанные питательные среды и культивируют 18...24 ч.

На глюкозо-кровяном МПА все виды патогенных стрептокок­ков образуют мелкие колонии, чаще с зоной гемолиза. У S. pneumoniae колонии круглые, полупрозрачные, плоские, с при­поднятым центром и краями, с зоной гемолиза типа «альфа»; в МПБ растет с равномерным помутнением среды. S. equi форми­рует мелкие, росинчатые, слизистые, правильной круглой формы колонии с узкой зоной бета-гемолиза, позднее они становятся серо-белыми, непрозрачными; в МПБ растет с помутнением сре­ды, образованием пушистых хлопьев, через 3...5 сут культивиро­вания бульон просветляется, на дне пробирки образуется осадок. У S. agalactiae (S. dysagalactiae) мелкие, сероватые, просвечиваю­щие колонии с бета- или двойной зоной альфа-гемолиза, при ро­сте в МПБ среда остается прозрачной, формирующиеся крупин­ки оседают на дно пробирки. S. pyogenes на кровяном МПА обра­зует мелкие, прозрачные, правильной круглой формы колонии с зоной бета-гемолиза, в бульоне растет с просветлением среды и выпадением зернистого осадка.

На следующем этапе из выделенных культур готовят мазки, окрашивают по Граму, микроскопируют. При обнаружении ти­пичных по морфологии и тинкториальным свойствам клеток бактерий переходят к следующему этапу.

Чтобы исключить стафилококковую, энтерококковую (род Enterococcus) инфекции, чистую культуру исследуют в нескольких пробах. Ставят тест на каталазу — стафилококки образуют ката-лазу, стрептококки нет. С целью дифференциации пиогенных ге­молитических стрептококков от энтерококков культуры высева­ют в МПБ, содержащий 40 % желчи крупного рогатого скота, МПБ с 6,5 % хлорида натрия. Энтерококки в отличие от гноерод­ных стрептококков растут на этих средах. Также проверяют чув­ствительность клеток культуры к желчи: в пробирку с МПБ, со­держащим 10 % желчи крупного рогатого скота, вносят 0,5 мл ис­следуемой суточной бульонной культуры и выдерживают при 37 °С 1 ч. При лизисе содержимое пробирки просветляется, энте­рококки не лизируются.

Параллельно изучают ферментативные свойства стрептокок­ков (табл. 18).

Серогрупповую принадлежность выделенного микроба опре­деляют в реакции преципитации. В РП используют стрептокок­ковые групповые преципитирующие сыворотки. Исследуемую культуру выращивают в МПБ в течение 18...20 ч, затем 7...9 мл культуры центрифугируют, надосадочную жидкость удаляют, к осадку добавляют 0,3...0,4 мл 0,2 н. раствора соляной кислоты, осадок суспендируют, взвесь прогревают в кипящей водяной бане 10 мин, охлаждают, добавляют каплю 0,04%-го спиртового раствора фенолфталеина и нейтрализуют 0,2 н. раствором гидро-ксида натрия. Жидкость приобретает бледно-розовый цвет. За­тем смесь вновь центрифугируют и надосадочную жидкость, со­держащую термостабильный полисахаридный антиген С, ис­пользуют как антиген для постановки реакции кольцепреципитции. По классификации Ленсфильд стрептококки на основании антигенных свойств полисахарида С можно отнести к той или иной серологической группе: А, В, С, D и т.д. S.pneumoniae не содержит серогрупповой полисахарид, но является антигенно-гетерогенным видом, который дифференцируют на типы в РА.

Биопроба. У выделенных культур стрептококков определяют патогенные свойства в биопробе на белых мышах. Для заражения используют только свежевыделенные штаммы в виде 18...20-ча­совых бульонных культур, которые по 0,5 мл вводят внутрибрюшинно трем мышам. Культуру признают патогенной при гибели не менее двух мышей.

В случае инфекции, вызываемой S. pneumoniae, практикуют выделение возбудителя из исследуемого материала методом био­пробы. С этой целью тканевую суспензию, разведенную стериль­ным физиологическим раствором в соотношении 1:2, вводят внутрибрюшинно белым мышам по 0,5 мл. В положительных случаях мыши погибают через 1...2 сут.

Биопрепараты. Вакцину против диплококковой септицемии телят, ягнят и поросят готовят из штаммов S. pneumoniae, выделенных от указанных видов животных. Культуры выращивают на полужидком агаре, инактивируют 0,4%-м раствором формалина, проверяют на стерильность, безвредность (на морских свинках), активность (на белых мышах).

Ассоциированная (поливалентная) вакцина против паратифа, пастереллеза и диплококковой септицемии поросят включает в себя кроме P. multocida и S. cholerasuis бактериальную массу S. pneumoniae.

Сыворотку против диплококковой септицемии телят, ягнят и поросят получают гипериммунизацией волов убитыми и живыми культурами возбудителя.

Инактивированные вакцины из стрептококков серологичес­кой группы С.

ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ

1. Приготовить мазки из культур стафилококков, стрептокок­ков, окрасить по Граму, промикроскопировать, зарисовать.

2. Описать культуральные свойства стафилококков и стрепто­кокков.

3. Изучить ферментативные свойства стафилококков и стреп­тококков.

4. Ознакомиться с биопрепаратами.

Контрольные вопросы

1. По каким критериям дифференцируют патогенные и непатогенные стафилококки?

2. Каковы основные виды патогенных стрептококков?

3.По каким критериям дифференцируют гноеродные гемолитические и фе­кальные стрептококки?

4.Каковы культуральные, морфологические и тинкториальные свойства стреп­тококков?

5.Какие биопрепараты выпускают против диплококковой септицемии молод­няка сельскохозяйственных животных?

Тема 23

ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА РОЖИ СВИНЕЙ И ЛИСТЕРИОЗА. БИОПРЕПАРАТЫ

Цель занятия. Ознакомить студентов с этапами лабораторной диагностики и свойствами возбудителей рожи свиней, листериоза, биопрепаратами.

Оборудование и материалы. Культуры вакцинных штаммов возбудителя рожи свиней и листериоза на МПА, в МПБ с инди­каторными бумажками на сероводород, культуры на средах Гисса с углеводами, перекись водорода, реактив Эрлиха, стерильные МПА, МПБ в пробирках, пипетки Пастера, трупы мышей, пав­ших после заражения вакцинными штаммами возбудителей, ин­струменты для вскрытия трупов животных, люминесцентный микроскоп, люминесцирующие сыворотки листериозные и ро­жистые, биопрепараты.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ

Рожа свиней. Инфекционная болезнь, преимущественно сви­ней в возрасте З...12мес. Спорадически встречается у крупного рогатого скота, ягнят, пушных зверей, грызунов, птицы; воспри­имчив человек. Болезнь протекает остро и хронически. Острое течение характеризуется признаками септицемии, воспалитель­ной эритемой, хроническое — эндокардитами и артритами.

Возбудитель рожи свиней — бактерия Erysipelothrix rhusiopathiae, род Erysipelothrix.

Лабораторная диагностика рожи свиней основана на результа­тах бактериологического исследования.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодом световой и люминесцентной микроскопии, выделение чи­стой культуры посевом на питательные среды и методом биопро­бы и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологическим и патогенным признакам.

Материал для исследования. В лабораторию направляют труп животного целиком или сердце (при хроническом течении обяза­тельно), печень, селезенку, почку, трубчатую кость. Материал не консервируют или помещают в стерильный 30%-й раствор гли­церина.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Возбудитель представляет собой прямую или слегка изогнутую тонкую палоч­ковидную грамположительную бактерию без спор, капсул и жгути­ков размером (0,2...0,3) х (0,8...2,5) мкм (рис. 76). Мазки-отпечатки из органов окрашивают по Граму и противорожистой люминесцирующей сывороткой. В положительных случаях в материале нахо­дят мелкие грамположительные палочки, располагающиеся оди­ночно, попарно или в виде скоплений. В препаратах из поражен­ных клапанов сердца при хроническом течении болезни возбуди­тель обнаруживают в форме нитей. В мазках, окрашенных люминесцирующей сывороткой, в положительных случаях нахо­дят светящиеся клетки бактерий типичной морфологии.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Возбудитель рожи — факультативный анаэроб, в первых генерациях ведет себя как микроаэрофил. Температурный оптимум 36...37 °С, рН 7,2...7,5. С целью выделения культуры возбудителя исследуемый материал засевают в МПБ или на МПА. Посевы культивируют 24...48 ч.

В МПБ возбудитель растет с очень слабым помутнением пи­тательной среды, без образова­ния пристеночного кольца или поверхностной пленки, через 48...72ч среда просветляется, на дне пробирки формируется не­значительный осадок, поднима­ющийся при встряхивании в виде облачка. На плотных сре­дах возбудитель образует мелкие росинчатые колонии (S-форма), иногда крупные, с неровными краями и поверхностью (R-форма). Посевы на плотных средах из-за малых размеров колоний лучше просматривать при помо­щи лупы. Из культур, выросших на питательных средах, готовят и микроскопируют мазки, окрашенные по Граму и люминесцирующей сывороткой. При обнаружении бактерий, типичных для возбудителя рожи свиней по морфологическим, тинкториальным и культуральным свойствам, у выделенных культур изучают фер­ментативные, серологические и патогенные свойства.

Возбудитель рожи разлагает с образованием кислоты без газа глюкозу, лактозу, галактозу, мальтозу; не ферментирует эскулин, сахарозу, маннит, дульцит, рамнозу; не образует каталазу, индол; выделяет сероводород; не растет в МПБ с 8,5 % хлорида натрия; вирулентные штаммы синтезируют гиалуронидазу.

Вид Е. rhusiopathiae подразделяют на 22 серовара, которые обо­значают цифрами. Наиболее распространены серовары 1-й и 2-й, которые ранее обозначали А и В. Для видовой серологической идентификации на практике используют обычную лечебно-профи­лактическую противорожистую сыворотку (см. «Биопрепараты»).

На предметное стекло наносят каплю иммунной сыворотки, разведенной физиологическим раствором (1:50), в которой за­тем тщательно суспендируют бактериологической петлей суточ­ную агаровую исследуемую культуру. Через 1...2мин учитывают результат: возбудитель рожи агглютинирует в сыворотке.

Биопроба. Метод применяют для изоляции возбудителя из иссле­дуемого материала, а также для определения патогенных свойств выделенных культур бактерий. Тканевый материал измельчают в ступке со стерильным физиологическим раствором в соотношении 1:10 и вводят подкожно по 0,1...0,2 мл белым мышам массой 16...18 г. При наличии возбудителя животные погибают через 2...4сут после заражения. Заражение мышей слабовирулентными культурами, например выделенными от свиней с хроническим течением болезни, может приводить к гибели животных в более поздние сроки или не вызывать летального исхода. Материал из трупов мышей подвергают бактериологическому исследованию.

Биопрепараты. Концентрированная гидроокисьалюминиевая формолвакцина против рожи свиней содержит культуры возбу­дителя серовара В, выращенные в бульоне Хоттингера, инактивированные формалином, сорбированные на гидроксиде алюми­ния. После формирования осадка вакцину концентрируют, сли­вая треть надосадочной жидкости. Вакцину контролируют на стерильность, безвредность и активность (на голубях).

Депонированная вакцина против рожи свиней представляет собой живую культуру матрикса Конева, сорбированную на гид­роксиде алюминия. Вакцину контролируют на чистоту роста, безвредность и остаточную вирулентность (считают пригодной для использования, если вакцина безвредна для голубей и виру­лентна для мышей).

Сухая живая вакцина против рожи свиней ВГНКИ из штамма ВР-2 представляет собой лиофильно высушенную культуру вак­цинного штамма ВР-2. Вакцину контролируют на чистоту роста, концентрацию микробных клеток (5*10⁹/мл), безвредность и ак­тивность на белых мышах. Так же готовят жидкую вакцину из штамма ВР-2.

Лечебно-профилактическую сыворотку против рожи свиней по­лучают гипериммунизацией свиней; контролируют на стерильность, безвредность и активность на белых мышах и признают активной, если она предохраняет от гибели мышей в дозах 0,01...0,02 и 0,03 мл.

Сухие рожистые люминесцирующие сыворотки для прямого метода иммунофлуоресценции предназначены для серологичес­кой идентификации возбудителя непосредственно в материале и в культуре.

Листериоз. Бактериальная инфекция сельскохозяйственных животных многих видов, грызунов, птиц и человека. Характери­зуется поражением центральной нервной системы, репродуктив­ных органов (аборты), молочной железы (маститы), признаками септицемии. Протекает остро и хронически.

Возбудитель листериоза — бактерия Listeria monocytogenes, род Listeria.

Лабораторная диагностика листериоза основана на результатах бактериологического исследования, в отдельных случаях приме­няют серологическую диагностику.

Бактериологическое исследование вклю­чает в себя обнаружение возбудителя в исходном материале ме­тодами световой и люминесцентной микроскопии и биопробы, выделение чистой культуры посевом на питательные среды и идентификацию возбудителя по культурально-морфологическим, ферментативным, серологическим и патогенным признакам (ме­тодом биопробы).

Материал для исследования. В лабораторию направляют трупы мелких животных (целиком), от крупных животных: голову (го­ловной мозг), печень, селезенку, почки, пораженные участки легких; для прижизненной диагностики — абортированный плод с оболочками, истечения из половых органов, секрет поражен­ной доли вымени, в случае необходимости кровь или сыворотку крови от больных или подозреваемых в заболевании животных.

Микроскопия препаратов из исходного материала. Возбудитель представляет собой грамположительную палочковидную бакте­рию с закругленными концами, без спор, размером 0,5...2мкм (рис.77). Листерии при 20.-.22*С, но не при 37...38 °С образуют жгутики. При выращивании на сывороточных средах формируют капсулу. Из исследуемого материала готовят и микроскопируют мазки, окрашенные по Граму, а также флуоресцирующими лис-териозными сыворотками. В тканевом материале листерии обна­руживают в виде грамположительных, нередко полиморфных па­лочек, располагающихся одиночно, парами, напоминающими римскую цифру пять, или по нескольку штук параллельно.

Выделение и идентификация культуры возбудителя. Листерии — факультативные анаэробы, температурный оптимум 36...38 "С, диа­пазон 4...45 "С, способны расти на средах с повышенным содержа­нием хлорида натрия. Посевы из исследуемого материала делают в МПБ или печеночный бульон и на агар с добавлением глюкозы (1%) и глицерина (2...3%), на кровяной агар. При исследовании загрязненного материала используют среды с селективными свой­ствами: МПА с теллуритом калия и полимиксином, среды, содер­жащие 10 % хлорида натрия. Для увеличения концентрации возбу­дителя в исследуемом материале рекомендуют часть материала хра­нить при 4°С до 30 сут. При получении отрицательных результатов в первичных посевах следует с интервалом 10 сут делать повторные высевы на среды, что увеличивает вероятность выделения возбуди­теля. Посевы инкубируют при 37 °С до двух недель.

На плотных питательных средах возбудитель растет в виде мелких росинчатых колоний, в косопроходящем свете — голубо­ватого цвета с зеленоватым оттенком и мелкозернистой структу­рой; на кровяном агаре вокруг колоний некоторых штаммов об­разуется зона бета-гемолиза. В МПБ рост возбудителя характери­зуется слабым помутнением среды, через 5...7 дней на дне про­бирки образуется слизистый осадок.