Материалы и оборудование

Стебли льна или крапивы, ножницы, нитки, большие пробирки, предметные и покровные стекла, пинцет, микробиологическая петля, скальпель, водные растворы фуксина или генцианвиолета, раствор иода в иодиде калия (реактив на гранулезу), большие пробирки с питательной средой Возняковской.

Ход работы

Рис. 29. Пектиноразрушающие бактерии: 1—Clostridium pectinovorum,2— Clostridium felsineum. Карболовый фуксин.

Для выделения пектиноразрушающих бактерий используют льняную или крапивную питательную среду. Из стеблей льна или крапивы готовят снопики длиной 5—7 см и связывают их по концам ниткой. Снопики помещают в большие пробирки, заливают на ¹/₃ объема водопроводной водой и кипятят 10—15 мин.

Кипячением удаляют экстрактивные вещества, которые могут служить источником углерода для сопутствующих масляно-кислых бактерий. Воду сливают, снопики заливают новой порцией воды, пробирки плотно закрывают ватными пробками и стерилизуют в автоклаве при 1 атм. 20 мин. Когда пробирки остынут, среду заражают кусочком свежей соломы льна. Соломинку вставляют в середину снопика. Зараженные пробирки помещают в термостат при температуре 35°С.

Через 4—5 суток в пробирках начинается процесс пектинового брожения, жидкость заметно мутнеет и пенится. Выделяющиеся газы выносят снопик на поверхность среды. Брожение заканчивается через 1,5—2 недели, снопики вновь опускаются на дно.

Для изучения морфологии бактерий пектинового брожения готовят прижизненные препараты. Снопик вынимают из пробирки, отжимают каплю жидкости со снопика на предметное стекло, добавляют каплю р-ра Люголя(иода в иодиде калия)

накрывают покровным стеклом и микроскопируют, пользуясь объективом ВИ-40. На препарате видны клетки Clostridium pectinovorum и Clostridium felsineum, вегетативные и спорулирующие, окрашенные иодом в иодиде калия на гранулезу в темно-синий цвет (рис. 29).

Получение обогащенной культуры Clostridium felsineum по методу Возняковской

Для получения обогащенной культуры возбудителя тепловой мочки льна Clostridium felsineum Ю. М. Возняковская предлагает использовать специальную питательную среду. Состав среды (г/л дистиллированной воды):

Картофельная мезга, содержащая пектиновые вещества —54,0

кукурузный экстракт (источник аминокислот, фосфора и зольных элементов) —3,95

(NH₄)₂SO₄ —2

CaCO₃ —4

FeCl₃ —0,375 мл 50% р-ра

Среду разливают высоким слоем в большие пробирки и стерилизуют в автоклаве при 1 атм 20 мин. Заражают среду петлей суспензии пектиноразрушающих бактерий из льняной среды или кусочком свежей соломы льна. Зараженные пробирки помещают в термостат при температуре 35—37°С.

Процесс пектинового брожения заканчивается на 4—5-е сутки. В среде наблюдается почти полная мацерация картофельный мезги. Для изучения морфологии Clostridium felsineum из жидкости в пробирке готовят накопительные мазки, окрашивают их фуксином и микроскопируют, пользуясь объективом МИ-90. Через 24—48 ч брожения на препаратах преобладают палочковидные вегетативные клетки Clostridium felsineum, клетки-спороносцы встречаются в небольшом количестве. На 4—5-е сутки на препаратах наблюдается масса спорулирующих клеток и свободнолежащих спор.

Получаемую таким образом культуру Clostridium felsineum используют в качестве закваски в промышленном производстве волокна на льнозаводах.