Моноклональными антителами

Моноклональные антитела (МКА) – это высокоспециализированные антитела, способные связываться лишь с одним типом эпитопа антигена. МКА получают методом гибридомной биотехнологии.

Гибридома образуется в результате гибридизации (слияния) антителопродуцирующей клетки определенной специфичности и опухолевой клетки. В качестве опухолевой клетки используется плазмоцитома - клетка, происходящая из молодых плазматических клеток. Озлокачествление плазматических клеток, способных функционировать неограниченное время, индуцируется определенным образом у мышей в лабораторных условиях. Затем методом отбора выделяется мутантная плазмоцитома, утратившая способность синтезироватьсобственныеантитела.

Далее производится иммунизация мыши антигеном системы АВ0 (или антигеном любой другой группы крови). Через некоторое время после начала образования антител к введенному антигену осуществляется забор селезенки и лимфатических узлов мыши. Из изъятых тканей готовится взвесь клеток. В эту взвесь в присутствии полиэтиленгликоля помещаются мутантные плазмоцитомы. В исследуемой среде происходит слияние клеток - образование гибридов (рис. 9).

Гибрид антителопродуцирующей клетки иммунизированной мыши и мутантной плазмоцитомы являетсягибридомой.

Рис. 9. Схема культивирования моноклональных антител

(из кн. Основы иммунологии под ред. Воробьева А.А. и др., 2006)

Гибридома – это клеточный гибрид, способный бесконечно производить себе подобные клетки (клон), синтезирующие абсолютно идентичные по структуре и иммунным свойствам высокоспецифичные антитела – моноклональные антитела. Если потребность в антителах иссякает, гибридому замораживают. Размороженная гибридома способна вновь синтезировать антитела.

За открытие и разработку принципов выработки моноклональных антител с помощью гибридом Нильс Ерне, Георг Келер и Сезар Мильштейн в 1984 году были удостоены Нобелевской премии.

Для определения групп крови системы АВ0 применяются солевые растворы, содержащие моноклональные антитела к антигенам наружной мембраны эритроцитов – цоликлоны анти-А, анти-В, а также смесь этих антител.

Моноклональные антитела анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами, произведенными от антителопродуцирующих клеток разных штаммов, и являются иммуноглобулинами М. Цоликлоны наносятся на плоскость по одной большой капле и затем перемешиваются с маленькими каплями исследуемой крови. Покачивая тарелку, наблюдают за ходом реакции в течение 3 минут[‡].

*Если соответствующий антителу антиген в эритроцитах отсутствует, капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинация не наблюдается.

*Если комплементарный антителу антиген присутствует на мембране исследуемых эритроцитов, происходит агглютинация эритроцитов, и делается заключение о наличии в эритроцитах соответствующего антигена.

*Если агглютинация произошла при взаимодействии с обоими цоликлонами (и с анти-А, и с анти-В), исключают неспецифическую агглютинацию: смешивают каплю исследуемой крови с каплей физиологического раствора. Если эритроциты в физиологическом растворе не агглютинировали, кровь относят к группе АВ(IV).

При определении группы крови параллельно выявляются антитела плазмы исследуемой крови. Для этого используют стандартные эритроциты разных групп крови. Эритроциты с известными антигенами смешивают с сывороткой исследуемой крови и наблюдают за реакцией. По наличию или отсутствию агглютинации стандартных эритроцитов судят о содержании соответствующих антител системы АВ0 в тестируемой крови.