Рептилазное время (батроксобиновое время)
Батроксобин (или рептилаза) - тромбинопо-добная протеаза из яда щитомордника обыкновенного, которая способна вызывать переход фибриногена в фибрин. Рептилаза отщепляет от фибриногена только фибринопептид А, что отличает ее от действия тромбина, который, кроме фибрино-пептида А, отщепляет от фибриногена еще и фибринопептид В (рис. 101) и активирует факторы V, VIII, XIII. Рептилаза не подавляется антитромбином, поэтому этот тест может использоваться для оценки полимеризации мономеров фибрина в присутствии гепарина. Рептилазное время часто определяют одновременно с ТВ (табл. 22).
Таблица 22
Тромбиновое и рептилазное время при различных состояниях
Нормальные значения рептилазного времени устанавливаются в каждой лаборатории, так как показатель зависит от реагентной и приборной
базы. Рептилазное время удлиняется при афибри-ногенемии и при некоторых формах дисфибри-ногенемии, часто не параллельно ТВ и в присутствии относительно высоких концентраций ПДФ (при гиперфибринолизе).
Рис. 101. Принцип и влияние факторов при постановке тестов тромбиновое время (ТВ) и рептилазное время.
Тромбин оказывает комплексный эффект, рептилаза отщепляет от фибриногена только фибринопептид А (ФПА), На ТВ активно влияет АТ-гепарин, на рептилазное время гепарин не влияет, ПДФ за счет ингибирования полимеризации фибрин-мономеров удлиняют как ТВ, так и рептилазное время
Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ
Отдельные факторы гемостаза
В случае обнаружения патологических изменений АЧТВ и/или ПВ необходимо проводить дополнительные исследования с целью выяснения причины этих отклонений. Несмотря на то что за последнее время для определения отдельных факторов гемостаза были разработаны методы с использованием хромогенных субстратов (амидолитические методы), многие лаборатории продолжают пользоваться коагуляционными технологиями с использованием контрольных плазм, обедненных по определенному фактору. Дефицитные плазмы получают: 1) путем имму-носорбции отдельных факторов с добавлением других факторов, 2) от доноров, больных гемофилией с недостаточностью одного из факторов свертывания. Важнейшими качественными критериями наборов с дефицитной плазмой являются очень низкий или неопределяемый уровень од-
ного фактора, высокий уровень других факторов, наличие в наборе калибраторов с дробным содержанием фактора, чтобы можно было построить калибровочную кривую как в зоне с нормальным, так и патологическим содержанием фактора. Для получения калибровочной кривой возможно разведение калибраторов. Ведущие мировые производители выпускают калибраторы, тестированные относительно стандартов ВОЗ (там, где они имеются). Следует подчеркнуть, что далеко не любая комбинация дефицитной плазмы и тест-наборов на ПВ или АЧТВ дают схожие результаты, поэтому следует пользоваться рекомендациями фирм-производителей дефицитных плазм и тест-наборов. Качество дефицитной плазмы и чувствительность реагентов имеют существенное значение в определении дефицита факторов в клинике.
Референтные диапазоны содержания факторов
В табл. 23 приведены референтные диапазоны активности факторов гемостаза в плазме и заболевания, при которых наблюдаются снижение или увеличение этих факторов. Для большинства факторов нормальный диапазон активности составляет 70-130%, для факторов V и VIII диапазон шире. Обычно умеренное снижение факторов (ниже нормального диапазона), так же как гетерозиготное носительство дефицита фактора, не сопровождается кровотечениями, однако при массивных оперативных вмешательствах или нарушениях функции тромбоцитов это может быть решающим моментом развития геморрагического синдрома. Количественная характеристика факторов является значимой для диагностики гемофилии и лечения с использованием гемоконцентратов. Содержание факторов свертывания крови важно знать перед операцией у больных с заболеваниями печени, злокачественными опухолями, сепсисом, нефротическим синдромом, у пациентов, принимающих антикоагулянты непрямого действия, так как оператив-
ное вмешательство, особенно обширное, в этих случаях может привести к дополнительному потреблению проблемных факторов и развитию кровотечения. Технологией с использованием дефицитных плазм определяются все факторы, за исключением фибриногена и фактора XIII. Эта технология представлена в многочисленных пособиях по исследованию факторов гемостаза, поэтому в данной книге воспроизводиться не будет.
В последние несколько лет появился интерес к выявлению случаев повышения содержания отдельных факторов гемостаза, что объясняется обнаружением хотя и относительно невысокой, но достоверной корреляции между повышенным содержанием факторов II, VII, VIII, IX, XI и увеличенным риском тромбозов. Повышение активности факторов может быть зарегистрировано коагуляционными методами с применением технологии значительного разведения плазмы или методами с использованием хромогенных субстратов.
Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ
Таблица 23
Диапазоны активности факторов гемостаза в плазме и клинико-диагностическое значение
изменения активности факторов
Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ
Принцип дифференцирования истинного дефицита факторов и действия ингибиторов
Удлинение АЧТВ и/или ПВ может быть вызвано дефицитом факторов свертывания или присутствием ингибиторов, в частности аутоантител, волчаночного антикоагулянта и др. Для дифференцирования дефицита факторов свертывания от присутствия специфического ингибитора или волчаночного антикоагулянта необходимо провести скрининговое исследование (количество тромбоцитов, АЧТВ, ПТ), исследование коррекции активности факторов или скрининговых тестов при смешивании тестируемой плазмы с нормальной, контрольной плазмой и тест разведения. Особенности проведения скрининговых тестов были описаны выше.
Исследование коррекции активности факторов свертывания проводится путем смешивания иссле-
дуемой плазмы с контрольной нормальной плазмой. Соотношения компонентов могут быть различными. Чаще применяется смешивание 1:1 (1 часть исследуемой плазмы / 1 часть контрольной), это соотношение удобно для подсчета и обладает неплохой чувствительностью. При низкой активности ингибитора можно использовать соотношение: 2 части исследуемой плазмы / 1 часть контрольной. При высокой активности можно использовать соотношение 1:4 и более и по степени коррекции косвенно судить об активности ингибитора.
После смешивания необходимо проводить тесты немедленно и через 1 час инкубации, что позволяет определить характер ингибитора (табл. 24).
Для более точной дифференциальной диагностики между истинным и вторичным дефицитом
Дифференциальная диагностика врожденного дефицита факторов VIII и IX, специфического ингибитора и волчаночного антикоагулянта
Таблица 24
можно провести пробу с разведением, по крайней мере, до 3 разных концентраций. Пробы с дефицитом показывают при разведении одинаковый расчетный процент фактора в цельной плазме. Пробы, в которых присутствует ингибитор, при разведении показывают относительное увеличение фактора, что связано с диссоциацией
Рис. 102. Метод разведения пробы позволяет различить истинный дефицит фактора и его ингибирование.
При истинном дефиците разведение не меняет относительной активности фактора, а при подавлении активности фактора ингибитором разведение сопровождается относительным повышением активности фактора
комплекса фактор-ингибитор и освобождением фактора из блокированного состояния (рис. 102).
Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ
Дата добавления: 2016-08-06; просмотров: 3071;