Опыт 3. Экспресс-диагностика патологий углеводного обмена.

Реакция Троммера с гидроксидом меди.

К 1 мл мочи приливают равный объем 10%-ного раствора гидроксида натрия и по каплям 1% раствор сульфата меди до появления неисчезающего осадка гидроксида меди (II). Появление при нагревании красного окрашивания свидетельствует о присутствии в моче глюкозы.

Выявление фруктозурии пробой Селиванова.

Метод основан на превращении фруктозы при нагревании и в присутствии соляной кислоты в гидроксиметилфурфурол, который конденсируется с резорцином (0,05% раствор в 20% соляной кислоте, реактив Селиванова), образуя соединение красного цвета.

В 2 пробирки наливают по 1 мл раствора резорцина и добавляют в одну из них 2 мл нормальной, а в другую - патологической мочи. Обе пробирки нагревают в водяной бане до закипания. При наличии в моче фруктозы появляется интенсивное красное окрашивание. Оценку производят в момент закипания; при более длительном нагревании положительную реакцию может дать и глюкоза.

3.3. Энзиматический метод полуколичественного определения глюкозы в моче с помощью тест-полоски "GLUCOPHAN".

Полоски "GLUCOPHAN" имеют поперечную полосу светло-желтого цвета, пропитанную растворами ферментов глюкозооксидазы, пероксидазы и красителя (производного бензидина). Глюкозооксидаза – флавопротеин, простетической группой которого является ФАД. Она катализирует перенос двух атомов водорода с глюкозы на кислород воздуха. Образующийся пероксид водорода расщепляется ферментом пероксидазой, за счет чего происходит окисление красителя. Изменение окраски красителя при его окислении свидетельствует о присутствии в моче глюкозы. Данный метод позволяет определить концентрацию глюкозы в моче от 0,1 до 2%.

Наливают в стаканчик небольшое количество исследуемой мочи. Погружают полоску "GLUCOPHAN" в испытуемую мочу так, чтобы желтая полоса полностью смочилась. Немедленно извлекают полоску из жидкости, выдерживают 2 минуты. Сравнивают изменившуюся окраску цветной полосы с цветной шкалой. При отсутствии глюкозы в моче цвет полоски не меняется. Находят наибольшее совпадение цвета полоски "GLUCOPHAN" с цветом на цветной шкале и ориентировочно определяют концентрацию глюкозы.

Литература

1. Березов, Т.Т. Биологическая химия. / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин. - М.: ОАО "Издательство "Медицина"", 2007. - 704 с.

2. Биохимия. / Под ред. Е.С. Северина. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2003. - 779 с.

3. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами. / Под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева. - М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. - 448 с.

4. Зубаиров, Д.М. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. / Д.М. Зубаиров, В.Н. Тимербаев, В.С. Давыдов. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2005. - 392 с.

5. Кушманова, О.Б. Руководство к лабораторным занятиям по биологической химии. / О.Б. Кушманова, Г.И. Ивченко. - М. - 1983.

6. Ленинджер, А. Основы биохимии / А. Ленинджер. - М., «Мир». - 1985.

7. Марри, Р. Биохимия человека. / Р. Марри, Д. Греннер, П. Мейес, В. Родуэлл. - Т. 1. - М.: Мир, 1993. - 384 с.

8. Марри, Р. Биохимия человека. / Р. Марри, Д. Греннер, П. Мейес, В. Родуэлл. - Т. 2. - М.: Мир, 1993. - 415 с.

9. Николаев, А.Я. Биологическая химия. / А.Я. Николаев. - М.: Медицинское информационное агентство, 2004. - 566 с.

10. Основы аналитической химии. / Под ред. Ю.А. Золотова. - Кн. 2. - М.: Высшая школа, 1996. - 461 с.

11. Справочник. Лабораторные методы исследования в клинике. / Под редакцией проф. В.В. Меньшикова. - М. Медицина. - 1987.

12. Филиппович, Ю.Б. Основы биохимии. / Ю.Б. Филиппович. - М.: Высшая школа, 1993. - 496 с.

13. Филиппович, Ю.Б. Упражнения и задачи по биологической химии. / Ю.Б. Филиппович, Г.А. Севастьянова, Л.И. Щеголева. - М.: Просвещение, 1986. - 144 с.

14. Филиппович, Ю.Б. Практикум по общей биохимии / Ю.Б. Филиппович и др. - Учеб. пособие. - М.: Просвещение, 1982.

15. Эллиот В, Эллиот Д. Биохимия и молекулярная биология. / В. Эллиот, Д. Эллиот. - М. - 1999.