Медицинская биотехнология и генная инженерия
Биотехнология — прикладное научное направление, занимающееся созданием биологических продуктов с использованием методов генной инженерии.
Быстрое развитие биотехнология получила во второй половине ХХ века, благодаря развитию науки и экономической целесообразности: с помощью микроорганизмов многие вещества получать в тысячи раз дешевле, чем синтезировать химически.
В настоящее время с помощью генно-инженерных методов получают диагностические, лечебные и профилактические препараты, в т. ч. вакцины, антигены, диагностикумы, гормоны (инсулин), антибиотики, иммуномодуляторы, интерфероны, цитокины, моноклональные антитела.
Генная инженерия — направление биотехнологии, позволяющее целенаправленно изменять наследственный материал живых существ.
Открытие, лежащее в основе методов генной инженерии, было сделано В. Арбером в конце 50–х — начале 60–х годов XX в. Он установил, что бактерии пытаются защитить себя от действия бактериофагов: с помощью ферментов-рестриктаз они разрезают ДНК вирусов, проникших в бактерию, на фрагменты и делают вирус неактивным. Десять лет спустя Г. Боуэр показал, что действие рестриктаз высоко специфично: они разрезают ДНК в строго определенных местах по одним и тем же основаниям, причем место фрагментации одной цепи смещено по отношению к другой на 4 пары оснований. При этом неровном разрезе возникают два выступающих конца, которые притягиваются друг к другу благодаря наличию водородных мостиков. Поэтому их называют «липкими» концами. Другой фермент — ДНК–лигаза — может, расходуя АТФ, легко вновь соединить липкие концы.
Если с помощью рестриктаз вырезать фрагменты ДНК из разных организмов, то они будут иметь подходящие друг к другу липкие концы, которые в присутствии ДНК–лигазы можно легко соединить. В результате образуются гибридные молекулы из ДНК различных организмов. Таким образом, чужеродная наследственная информация «встраивается» в исходную ДНК.
В качестве векторов для переноса генов в генной инженерии используют плазмиды и бактериофаги.
Метод клонирования заключается в том, что выделенный ген вводится в состав вектора.
Вектор затем трансфецируется в быстро размножающуюся, неприхотливую бактерию-хозяина для репликации. Поскольку бактерии делятся очень быстро, то введенная чужеродная ДНК быстро удваивается, т. е. происходит ее клонирование. Путем клонирования любой фрагмент ДНК может быть размножен в бактериях в миллиарды раз, а потом с помощью рестриктаз снова выделен. Так была найдена возможность получения нужных фрагментов ДНК в больших количествах и возможность получения определенных генов, которые, будучи встроенными в микроорганизмы, направляют синтез новых белков (рис. 75). | |
Рис. 75. Клонирование ДНК |
Цели генной инженерии:
– модификация естественных генов человека, животных, микроорганизмов (удаление генов вирулентности и получение аттенуированных вакцинных штаммов);
– синтез новых генов (перенос генов в геном других микроорганизмов) и изучение закономерности экспрессии генов;
– получение генно-инженерных продуктов и использование их в клинической практике.
Используемые технологии:
– создание трансгенных организмов с заданными свойствами. Основная проблема — неясность отдаленных последствий применения трансгенных организмов;
– гибридизация клеток и получение моноклональных антител, отличающихся высокой специфичностью действия. Сегодня моноклональные антитела широко используется в диагностических исследованиях (определение иммунофенотипа клеток), в перспективе предполагается их использование с лечебной целью;
– использование рекомбинантных микроорганизмов, продуцирующих гормоны (инсулин, продуцируемый E. coli), вакцины (HBs–антиген, продуцируемый дрожжами-сахаромицетами = вакцина против гепатита В), цитокины (рекомбинантный интерферон, продуцируемый E. coli).
Геномика
Геномика— наука о строении и функционировании генома, изучающая:
– хранение генетической информации (геном и отдельные гены на молекулярном, индивидуальном и популяционном уровнях);
– передачу генетической информации (механизмы экспрессии и регуляции генов, возможности переноса генов в другие системы);
– реализацию генетической информации в конкретные свойства и признаки организма;
– причины и механизмы изменения генетической информации на разных этапах развития организма, взаимосвязи между генами и их эволюцию;
– клонирование организмов и использование знаний в генно-инженерных целях;
– создание естественной классификации микроорганизмов (генеалогического древа) на основе генетических признаков;
– разработку высокоточных методов диагностики и идентификации микроорганизмов — определение плазмидного профиля, рестрикционный анализ, молекулярная гибридизация, ПЦР, секвенирование.
Направления геномики:
1. Структурная — изучает первичную структуру генома (секвенирование генома), границы генов и их организацию, структуру белков и других биомолекул клетки, организацию генома. Использует методы картирования, секвенирования, рентгенструктурного анализа, биоинформатики.
2. Функциональная — изучает функции генов и механизмы регуляции их активности, экспрессию генов при физиологических и патологических процессах. Использует методы биоинформатики, клонирования, направленного мутагенеза, ядерно-магнитного резонанса.
Биоинформатика — направление биологии, основанное на компьютерном анализе первичной, вторичной, третичной структуры молекул ДНК, молекул РНК и белков (т. е. их полных сиквенсов или сиквенсов их фрагментов). Для этого используются специальные компьютерные программы и информационные базы данных.
3. Эволюционная—проводитсравнительный анализ от признака к гену, использует эти знания в таксономических целях, выявляет родственные связи между организмами (рис. 76).
Рис. 76 . Способы представления генетических связей
при составлении генеалогического древа
Разделы геномики:
1. Транскриптомика—изучает транскриптомы — совокупность мРНК клетки и изменения в них в зависимости от среды и стадии развития.
2. Протеомика—изучает закономерности функционирования белков клетки в конкретный период ее развития, характер и последствия их биологических взаимодействий, роль в регуляторных и эффекторных процессах.
3. Метаболомика — изучает метаболиты и изменения в их составе в разные фазы жизненного цикла.
Дата добавления: 2021-02-19; просмотров: 378;