БИОТРАНСФОРМАЦИЯ ОРГАНИЧЕСКМХ АНИОНОВ

Пигментный обмен.Билирубин сыворотки крови образуется в основном при разрушении гемоглобина стареющих эритроцитов, но от 10 до 20% билирубина возникает при распаде незрелых клеток в костном мозге, а также в печени из предшественников гема и при распаде негемоглобинных гемсодержащих протеинов. Билирубин, образующийся внепеченочно, циркулирует в плазме в связи альбумином, который обеспечивает транспорт нерастворимог8о в воде пигмента. Билирубин, попавший в паренхиматозные клетки печени, становится растворимым в воде благодаря внутриклеточному связыванию с глюкуроновой кислотой. Этот процесс катализируется микросомальным ферментом глюкуронилтрансферазой. Большая часть связанного билирубина выделяется в желчь в виде диглюкуронида, а небольшое количество – в виде моноглюкуронида.

Гипербилирубинемия возникает вследствие трех причин: сверхпродукции желчного пигмента; нарушения захвата, связывания или экскреции билирубина; проникновения несвязанного или связанного пигмента в кровь из поврежденных печеночных клеток или же6лчных путей.

Повышение уровня несвязанного билирубина в сыворотке объясняется сверхпродукцией пигмента, нарушением захвата или связывания, а содержание связанного билирубина повышается в результате уменьшения экскреции или обратного попадания пигмента из гепатоцитов в сыворотку.

Билирубин сыворотки крови определяют колориметрическими и спектрофотометрическими методами. В клинической практике наибольшее распространение получили колориметрические методы, в частности ван ден Берга и Ендрашика. Несвязанный билирубин дает непрямую реакцию ван ден Берга, т.е. розовое окрашивание с диазореактивом происходит только после добавления спирта. Связанный билирубин реагирует прямо, без добавления этанола. В норме содержание общего билирубина составляет от 3,4 до 17,1 мкмоль/л в непрямой реакции ван ден Берга. Следует помнить, что по методу ван ден Берга можно получить заниженные данные о содержании билирубина в связи с потерей пигмента при осаждении белка, а также на фоне приема некоторых лекарств (салицилаты, сульфаниламиды), отделяющих билирубин от альбумина плазмы и вызывающих перенос пигмента в ткани.

В настоящее время в качестве унифицированного метода определения билирубина утвержден метод Ендрашика, позволяющий определять как общее содержание билирубина, так и его фракции. Метод основан на том, что в присутствии раствора кофеина билирубин (несвязанный и связанный) диазотируется диазолбензолсульфоновой кислотой и дает светло-красное окрашивание, выявляемое колориметрически. Отдельно определяют уровень связанной с глюкуроновой кислотой фракции (прямой билирубин) и вычисляют (путем вычитания) уровень непрямого билирубина. Нормальные значения билирубина по этому методу составляют 6,8-20,5 мкмоль/л, прямой билирубин – 0,86-4,3 мкмоль/л.

Выраженность гипербилирубинемии не является характерной для какой-либо желтухи. Однако неосложненный гемолиз редко сопровождается повышением уровня билирубина сыворотки выше 85,5 мкмоль/л. Паренхиматозные повреждения или неполная внепеченочная обструкция конкрементами обусловливают более низкие показатели билирубина сыворотки, чем раковая обструкция общего желчного протока. У больных вирусным гепатитом высокий уровень билирубина обычно наблюдается при тяжелом течении болезни, тем не менее возможен летальный исход при фульминантном гепатите с незначительным повышением концентрации билирубина.

Обнаружение билирубина в моче указывает на заболевание печени, так как в норме моча свободна от пигмента. Большинство качественных реакций для определения билирубина в моче основано на применении различных красителей, превращающих билирубин в ярко-зеленый биливердин. Наибольшее распространение получили пробы Розина-Труссо и Харрисона-Ватсона-Хавинсона.

Клиническое значение выявления билирубина в моче состоит в обнаружении подозреваемой желтухи как раннего симптома гепатобилиарного заболевания. Хорошо известно раннее выявление с помощью этого теста вирусного или токсического гепатита. Отсутствие билирубина в моче при желтухе предполагает наличие несвязанного билирубина в крови, ввиду того что только связанный билирубин выделяется в мочу.

Уробилин мочи (уробилиновые тела). Уробилиногенурия и уробилинурия имеют одинаковое практическое значение, так как это одно и то же вещество в двух формах. После непродолжительного соприкосновения свежесобранной мочи с воздухом уробилиногеновые тела переходят в уробилиновые.

В нормальных условиях в общий кровоток и в мочу попадает лишь небольшое количество уробилиногена. В моче за сутки можно обнаружить от 1 до 4 мг уробилиновых тел (уробилина).

Для обнаружения уробилина в моче используют качественную реакцию Шлезингера, количественное определение проводят с реактивом Эрлиха.

Клиническое значение имеет отрицательная реакция на уробилин в моче, что свидетельствует о прекращении поступления билирубина в кишечник: на высоте желтухи, когда имеется внутрипеченочный холестаз, пигменты не выделяются в мочу и кал. Появление уробилина в моче – один из ранних признаков выздоровления.

Содержание уробилина в моче повышено не только при болезнях печени, но и при усиленном гемолизе, лихорадочных состояниях, активизации гнилостных процессов в кишечнике.

Пробы с использованием красителей (исследование поглотительно-выделительной функции печени). Изучение скорости выделения веществ, метаболизируемых только печенью, позволяет сделать заключение о суммарной функциональной способности печени.

Бромсульфалеиновая проба. После внутривенного введения краска быстро захватывается из крови в основном печенью и впоследствии более медленно выделяется в желчь. Различные модификации БСП основаны на том, что удаление красителя из крови замедленно при болезнях печени. Концентрацию бромсульфалеина в плазме исследуют через определенные промежутки времени после внутривенного введения 5% стерильного раствора бромсульфалеина из расчета 5 мг/кг. Кровь для исследования берут через 3 и 45 мин после инъекции краски из локтевой вены другой руки. Показатель, полученный через 3 мин, принимают за 100%; по отношению к нему вычисляют процент красителя, оставшегося через 45 мин. В крови в норме через 15 мин остается максимум 25%, а через 45 мин – около 5% краски.

Задержка бромсульфалеина в плазме соответствует тяжести поражения печени. БСП положительна у большинства больных острыми и хроническими диффузными болезнями печени. Положительные результаты пробы имеют особенно большое значение при хроническом персистирующем гепатите, жировом гепатозе, компенсированных циррозах печени. БСП всегда бывает положительной при внутри- и внепеченочном холестазе с желтухой, что связано с нарушением выделения желчи.

Подчеркивая чрезвычайно высокую чувствительность БСП в выявлении печеночной дисфункции, следует указать, что ее роль в разграничении паренхиматозной и механической желтух невелика, так как при билирубине, превышающем норму в 2-2,5 раза, технически проведение пробы затруднено.

Широкое применение БСП сдерживается дефицитностью и дороговизной красителя. При проведении пробы следует помнить о возможных аллергических осложнениях; описаны тромбофлебиты локтевых вен при введении краски.