Люминесценция. Фосфоресценция, флуоресценция. Классификация видов люминесценции в зависимости от вида возбуждения.
Люминесценция – спонтанное излучение тепла, избыточное при данной температуре тела над тепловым излучением, длительность которого значительно превышает период световых волн. Период световых волн составляет 10-15 c, а длительность люминесценции как минимум - 10-10 c.
Типы люминесценции по длительности свечения:
Флуоресценция (10-8 с)- быстрое свечение, кратковременное, остаточное -излучательный переход возбужденного электрона из синглетного состояния S1 в основное состояние S0
Фосфоресценция (10-3 – 10-4 с и более) – длительное свечение, продолжительное -излучательный переход возбужденного электрона из триплетного состояния T1 в основное состояние S0.
а) ν люм = ν б) ν люм ˂ ν в) ν люм ˃ ν
Основной энергетической характеристикой люминесценции является ее энергетический выход η - отношение энергии, которая люминофором излучается, к энергии, которую люминофор поглощает: η = E/E0
Люминесцентный анализ по методике исследования делится на:
· макроанализ
· микроанализ
· флуоресцентные зонды и метки.
Также люминесценцию используют для создания осветительной и регистрирующей аппаратуры (лампы дневного света, экран осциллографа).
Классиф. по виду возбуждения:
▪Фотолюминесценция
▪Рентгенолюминесценция
▪Радиолюминесценция
▪Катодолюминесценция
▪Электролюминесценция
▪Хемилюминесценция
▪Биолюминесценция
Механизм биохемилюминесценции определяется реакциями окисления.
В биологических системах хемилюминисценция возникает при рекомбинации перекисных свободных радикалов липидов.
40. Механизмы люминесценции. Возможные варианты протекания этого процесса. Правило Стокса. Энергетический выход, закон Вавилова.
Люминесценция – спонтанное излучение тела, избыточное при данной температуре тела над тепловым излучением, длительность которого значительно превышает период световых волн. Период световых волн составляет 10-15 c, а длительность люминесценции как минимум - 10-10 c.
Резонансная люминесценция – характерна для атомов и некоторых простых молекул при их возбуждении в газовой фазе. Возвращение атомов из возбужденного в нормальное состояниесопровождается излучением кванта люминесценции, равного поглощенному кванту. Обычно у возбужденных атомов происходят те или иные энергетические потери. В результате излучаемые кванты меньше поглощаемых и люминесценция имеет большую длину волны.
Стоксова люминесценция – При взаимодействии с окружающими атомами возбуждённый атом может передать им часть энергии и перейти на уровень 2’, при переходе с которого и происходит люминесценция. Уровень испускания 2’ лежит ниже уровня 2, часть энергии при возбуждении теряется на тепло, а длина волны испущенного света больше, чем поглощённого
Антистоксова люминесценция – получается, если квант света поглощен возбужденной молекулой. Длина излучаемой волны меньше длины волны возбуждающего света
Правило Стокса: Спектр люминесценции сдвинут относительно спектра вызвавшего его света в сторону больших длин волн.
Энергия кванта, вызвавшего возбуждение (hν0 ), при поглощении его веществом, частично переходит в другие энергии:
Основной энергетической характеристикой люминесценции является ее энергетический выход η - отношение энергии, которая люминофором излучается, к энергии, которую люминофор поглощает: η = E/E0.
I – интенсивность люминесцентного излучения, λ – длина волны
Энергия кванта, вызвавшего возбуждение (hν0), при поглощении его веществом частично переходит в другие энергии: hν0 = hνлюм + ΔE
Поэтому: hνлюм<hν0,
λлюм> λ0.
Согласно закону Вавилова энергетический выход люминесценции сначала возрастает пропорционально возрастанию длины волны возбуждающего света, а потом резко падает:
η = E/E0 = hν/(hν0) = λ/λ0. (энергетический выход пропорционален длине волны возбуждающего света).
41.Применение люминесценции в биологии и медицине.
Люминесцентный анализ - совокупность методов для определения природы и состава вещества по спектру его люминесценции.
• Качественный анализ - определение наличия (или отсутствия) каких-либо веществ (молекул) по форме спектра люминесценции. При этом можно изучать структуру молекул вещества; межмолекулярное взаимодействие; химические превращения.
• Количественный анализ - определение количества вещества по интенсивности спектра люминесценции (можно обнаружить массу вещества m = 10-10 г).
Если люминофором является растворенное вещество, то при невысокой оптической плотности раствора интенсивность люминесценции пропорциональна концентрации раствора. Поэтому по интенсивности люминесценции можно судить о концентрации раствора. Для этого интенсивность люминесценции исследуемого раствора (Ιχ) сравнивают с интенсивностью люминесценции раствора (I0), концентрация которого известна. Неизвестную концентрацию Сх находят по формуле
По методике исследования люминесцентный анализ можно представить следующей схемой.
Макроанализ - наблюдение невооруженным глазом люминесценции объектов, облученных УФ-излучением:
- проверка качества и сортировка пищевых продуктов
- сортировка фармакологических средств
- свечение волос, чешуек, ногтей при диагностике их поражения грибком и лишаем.
Микроанализ - исследование люминесцирующих микрообъектов при помощи специальных люминесцентных микроскопов, в которых есть специальный осветитель, содержащий ртутную лампу со светофильтром, пропускающим УФ-излучение.
Флуоресцентные зонды. В некоторых медицинских исследованиях применяются специальные люминофоры, вводимые в организм и распределяющиеся по тканям в соответствии со своими свойствами. Такие люминофоры получили название флуоресцентных зондов. Например, при введении раствора такого люминофора в кровь он разносится по всему организму и диффундирует в дерму и эпидермис. Люминесценция возбуждается длинноволновым ультрафиолетовым излучением и наблюдается в видимом свете. В поверхностных тканях с пониженным кровоснабжением люминесценция появляется позже, чем в тканях с нормальным кровоснабжением.
Флуоресцентные метки. Флуоресцирующие молекулы можно ковалентно связывать с определенными молекулами, и затем эту систему вводить в исследуемый объект. Такие молекулы называются флуоресцентными метками. Примером является использование флуоресцентно меченых антител. Если добавить такие антитела к суспензии смеси клеток, то они связываются только с теми из них, на поверхности которых находятся специфические к данному антителу антигены. Возникает яркая люминесценция определенных клонов клеток, наблюдаемая в люминесцентном микроскопе. Данная методика используется в иммунологических исследованиях крови.
Дата добавления: 2020-11-18; просмотров: 538;