Выделение и идентификация

Выделение иридоидов проводят водой, водноспиртовыми растворами, 25% водным раствором хлорида натрия. Выделение иридоидных гликозидов с растительного материала осложняется их чувствительностью к ферментам, кислотам, а в случае ацетилированных гликозидов и к щелочам. Учитывая это при их выделении растительное сырье предварительно обрабатывают карбонатом кальция (сырье – карбонат кальция 10 : 1) для нейтрализации органических кислот. Ферменты инактивируют нагреванием свежего сырья при температуре около 100° С с последующим высушиванием при 60° С.

Очищают извлечение от липофильных веществ экстракцией растворителями, которые не смешиваются с водой (петролейный эфир,четырех-хлористый углерод) , а от сопутствующих фенольных соединений через слой нейтральной окиси алюминия.

Примеси сахаров отмывают водой после адсорбции иридоидных гликозидов на активированном угле. Десорбцию иридоидов осуществляют водно-спиртовыми смесями, которые потом упаривают под вакуумом в нейтральной среде.

Отделение иридоидов от дубильных и фенольных соединений осуществляют обработкой экстрактов (извлечений) солями тяжелых металлов ( ацетатом свинца), с последующим его удалением с помощью сероводорода и сульфида натрия.

Разделение очищенных фракций на отдельные компоненты проводят на хроматографических колонка с полиамидным сорбентом, силикагелем, целлюлозой или с помощью препаративной тонкослойной хроматографии.

Для доказательства присутствия иридоидов в растениях часто используют реактив Трим-Хилла (5 мл концентрированной соляной кислоты, 10 мл 0,2% раствора сульфата меди, ледяная уксусная кислота – 100 мл). При наличии иридоидов в спиртовом извлечении наступает голубое окрашивание. Реактив Шталя (n – диметиламинобензальдегид- 3 г., концентрированная соляная кислота – 5 мл., этанол - до 100 мл.). С иридоидами группы аукубина дает синюю или голубую окраску.

Многие иридоиды образуют с минеральными кислотами и ферментом эмульсином синие, зеленые или сине-зеленые пигменты.

Для обнаружения иридоидов широко используется бумажная и тонкослойная хроматография. При хроматографировании на бумаге часто используют следующие системы растворителей:

- метанол – вода (1 : 1)

- пропанол – вода (4 : 1)

- бутанол – уксусная кислота – вода (4 : 1: 5) и др.

При использовании тонкослойной хроматографии на силигале использует системы растворителей:

- хлороформ – этанол (1 : 1)

- хлороформ – этанол (3 : 1)

- этанол – ацетон (3 : 7)

- этилацетат – метанол (4 : 1) и др.

Для обнаружения иридоидов на хроматограммах последние обрабатывают реактивом Трим–Хилла (пятна иридоидов окрашиваются в синий цвет), или реактивом Бэкон–Эдельмана (0,5 г бензидина и 10 г уксусной кислоты в 100 мл этанола) и нагреванием обработанных хроматограмм 15 минут при 110ºC в сушильном шкафу. Иридоиды окрашиваются в цвета от лимонно–желтого до коричневого.

Для количественного определения содержания иридоидов используют колориметрический метод, основанный на получении окрашенных соединений вышеуказанными реактивами, спектрофотометрический, хромато – спектрофотометрический и ВЭЖХ.

Для установления структуры иридоидов используют их физико- химические свойства, продукты гидролиза, сравнение УФ-, ИК-, ПМР – спектров со спектрами известных образцов.