Химичесике методы исследованя крови

Индивидуализация означает выделение отличающих признаков индиви­дуума из массы присущих ему однородных признаков. Это означает, что вначале необходимо определить, принадлежит ли вещество про­бы тканям живого организма, для чего особенно пригодно обнаружение ге­моглобина, который, по-видимому, всегда присутствует в отделившихся клетках тканей тела животного или человека. В качестве лабораторного метода предпочтительна порфириновая проба концентрированной серной кислотой при ультрафиолето­вом облучении, весьма чувствительная на присутствие гемоглобина, который проявляется специфически — в виде красновато-оранжевой флуоресценции. Смешения с ярким голубовато-белым свечением отбеливателя, наблюдае­мым на стираных материях, опасаться не следует: при пропитанных кровью волокнах оно, как показывает практичес­кий опыт, перекрывается флуоресценцией гемоглобина(См.прил.Б). Если достигнут положительный результат, следует попытаться получить более точные дан­ные о биологическом виде, кровь которого обнаружена в веществе пробы, т.е. определить, принадлежит кровь человеку или животному. Сделать это относительно просто при помощи диффузионного теста по Охтерлони. Суть его заключается в том, что белок особи определенного ви­да, встречаясь с антисывороткой, искусственно изготовленной для данно­го вида, коагулирует с ней. Для проведения теста по Охтерлони на предмет­ное стекло наносится тонкий слой желатина. После застывания в нем выре­зают одну центральную и шесть расположенных по окружности лунок (гнезд). Центральную лунку заполняют веществом пробы, растворенным при максимальной концентрации в физиологическом растворе хлористого натрия (0,9 %-ный водный раствор NaСl). В остальные лунки отмеряют по одной капле соответствующей антисыворотки. Затем подготовленный препа­рат выдерживают в течение ночи во влажной камере. Раствор, содержащий белок, диффундирует в желатине кругообразно от места нанесения. При этом, если раствор белка вступает во взаимодействие со специфичной для него антисывороткой, в месте встречи оба белковых тела коагулируют в результате реакции друг с другом. Образуется преципитат (осадок), кото­рый путем проявления в тонирующем растворе можно сделать видимым.. На рисунке отчетливо виден преципитат (не свойствен­ный белку человека) между центром и верхней лункой.

Антисыворотки существуют также для определения принадлежности следа крови распространенным домашним и диким животным, что может иметь значение при столкновении с животными. На­ходясь после изъятия в проветриваемом и сухом месте, пробы крови и кле­ток тканей тела в течение длительного времени сохраняют свои специфи­ческие характеристики.

Если установлено, что следы крови или частицы тканей тела оставлены человеком, то с помощью хромосомного анализа (ХУ — мужские, XX — жен­ские хромосомы) можно определить их половую принадлежность. Для этого пробу, предварительно закрепленную метанолом на предметном стекле, флуохромируют и фотографируют в отраженном свете через микроскоп, дающий 200—1000-кратное увеличение. При максимально свежих пробах можно использовать реакцию на присутствие полового хроматина, а имен­но двух Х-хромосом, т.е. положительно может быть доказана лишь принад­лежность к женскому полу.

Важнейшей возможностью индивидуализации вещества следа, принадле­жащего человеку, является определение факторов, или сывороточных групп, крови, причем эффективность исследования в значительной мере зависит от количества вещества пробы и степени его сохранности.

Признаки групп крови системы АВО могут быть обнаружены различны­ми методами:

а) метод абсорбции с применением антисыворотки С известным титром (интенсивность в отношении эффективности связывания). Падение титра по меньшей мере на три ступени позволяет делать вывод относительно груп­пы крови, соответствующей данной антисыворотке. Метод требует значи­тельных количеств исследуемого вещества;

б) метод абсорбции-элюции (отщепление агглютинина) по Николь и Перейре. Для этого метода требуется очень мало вещества (около 2 мг). След вначале фиксируют на носителе (ватной палочке). Антитела, добавлен­ные к зафиксированному следу, связываются со своим гомологичным ан­тигеном; избыток (несвязанные антитела) удаляется многократным промы­ванием вещества физиологическим раствором поваренной соли при низкой температуре. После этого связанные в следе антитела отщепляют при более высокой температуре (около 56—58°С). Отщепленные антитела присут­ствуют в элюате, и сообразно этому происходит агглютинация соответству­ющих клеток крови. Пробы, сохраняемые в высушенном состоянии, пригод­ны для исследований в течение года;

в) обнаружение агглютинина по Латтесу: агглютинация в пределах поверхности высушенных проб крови после их вымачивания в физиологи­ческом растворе с контрольными кровяными тельцами. Недостаток мето­да: требуется относительно большое количество исследуемого вещества, надежность — около 14 суток; преимущество метода: положительное обна­ружение группы О (См. прил. В).