II. ЛАБОРАТОРНЫЙ ПРАКТИКУМ

Работа 1. Анализ аминокислот и белков

Качественный анализ аминокислотных смесей методом бумажной хроматографии.

Разметить хроматографическую пластинку, как показано на рис. 1. В точки 1, 2, 3 наносят капилляром растворы аминокислот, в точку 3 – раствор смеси аминокислот. Хроматограмму подсушивают над теплой плиткой.

Для проявления хроматограмму помещают в хроматографический сосуд, на дно которого налита смесь бутанола, уксусной кислоты и воды (15:3:7) так, чтобы растворитель не доходил до линии старта. Сосуд закрывают крышкой и оставляют хроматограмму на время, за которое проявитель пройдет путь снизу вверх. Хроматограмму вынимают из сосуда, отмечают границу фронта проявителя и высушивают. На высушенную хроматограмму наносят в спрей-камере при помощи пульверизатора 0,5%-ный раствор нингидрина в ацетоне. Когда ацетон испарится, хроматограмму помещают на термостолик при 70°С на 15 мин. Позиции аминокислот на хроматограмме выявляются в виде фиолетовых пятен.

Рассчитывают R_f (коэффициенты распределения) по формуле:

R_f = Х_i / Х₀,

где Х₀ – расстояние от линии старта до линии форонта растворителя, Х_i- расстояние от линии старта до середины пятна (рис. 1).

Сопоставляя величины R_f аминокислот-свидетелей и аминокислот исследуемой смеси, делают заключение о природе аминокислот в составе смеси.

Рис. 1. Хроматограмма

Цветные реакции на белки.

Реакция Миллона.

Реактив Миллона состоит из нитратов ртути (I) и (II) в HNO₃ с примесью HNO₂. Реакция реактива Милона с белками обусловлена присутствием в них остатка тирозина.

В пробирку наливают 0,5 мл раствора белка и 0,5 мл реактива Миллона. Образуется белый осадок под действием соли ртути и азотной кислоты, входящих в состав реактива Миллона. При нагревании осадок окрашивается сначала в розовый, а затем в коричнево-красный цвет.