Результаты исследований, проведенные в западной Европе

В результате проведенных исследований сделаны следующие выводы:

1. Среди серопозитивных по ВИЧ лиц не обнаружено ни одного человека с мутацией d/d, что подтверждает защитный против ВИЧ-инфицирования характер мутации.

2. Достоверно установлено, что у лиц с генотипом +/d СПИД начинается в среднем позже и болезнь прогрессирует медленнее, чем у лиц с генотипом +/+. Однако это справедливо только для лиц, инфицированных при сексуальных контактах, но не для гемофиликов. Это связано, по-видимому, с разными путями трансмиссии и уровнем экспозиции вирусом, так как гемофилики получают большую дозу вируса при внутривенных инъекциях, чем передается при сексуальных контактах.

3. Лица с генотипом d/d из группы риска при множестве сексуальных контактов экспозировались, скорее всего, как М-тропным NSI-вирусом, так и Т-тропным SI-вирусом, однако остались неинфицированными, хотя имели функционально активные рецепторы Fusin, CKR-1, CKR-2b. Это дает возможность предположить центральную роль корецептора CKR-5 в трансмиссии и/или дальнейшем распространении как М-тропных, так и Т-тропных вирусов в организме in vivo.

Самый высокий уровень резистентности к ВИЧ, связанный с мутацией гена белка-корецептора CCR5, существует у представителей финно-угорской группы: финнов, эстонцев, венгров, мордвин. Наличие такой мутации в одном из двух парных генов здесь достигает 15-17%. Достаточно много подобных людей среди населения Северной Европы, на юге и на востоке их число существенно меньше. Так, среди афроамериканцев они составляют всего 1-2%. А среди представителей многих других рас их вообще нет. Таким образом, существует градиент распределения ВИЧ-устойчивых людей по планете (рис. 19.2).

Мутация гена корецептора CKR-5 по грубой оценке, проведенной на основании имеющихся данных исследований появилась 150000- 200000 лет назад. Относительно более высокая частота её встречаемости среди европеоидов в Западной Европе позволяет предположить об участии в отборе исторического селективного давления, осуществляемого, возможно, другими вирусами или паразитами, использующими для инфицирования рецептор CKR-5.

Рис. 19.2. Градиент распределения ВИЧ-устойчивых людей по планете(цветовой переход на карте соответствует изменению значений частоты (указан в шкале интервалов). Карта выявляет четкую клинальную изменчивость: падение частоты мутации от Северной Европы (выше 15%) к югу и востоку. Так, если в Европе в целом частота мутации превышает 5%, то в Африке южнее Сахары и Восточной Азии мутация практически отсутствует. (рис. д.б.н.Е.В. Балановской).

Для выявления делеции 32 пары оснований в гене CKR-5 были разработаны следующие методы:

1. Метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) с праймерами, фланкирующими область в позиции 760- 942 гена CKR-5, с последующей детекцией полученных амликонов гель-электрофорезом в агарозном геле. Дикий тип (+/+) дает в электрофорезе одну полосу 182 пары оснований; смешанный тип (+/d) дает две полосы - 182 и 150 пар оснований; мутантный тип (d/d) -- дну полосу 150 пар оснований.

2. Метод ПЦР с праймерами, фланкирующими полный ген CKR-5, с последующей рестрикцией ампликона рестриктазой Hinf I и детекцией рестриктов методом SSCP (конформационный полиморфизм одноцепочечных нуклеиновых кислот).

3. Метод ПЦР с праймерами, фланкирующими область CKR-5 гена в 732 пары оснований, с последующей рестрикцией ампликона рестриктазой EcoRI, гель-электрофорезом, гибридидизацией с 32-Р-меченным зондом и радиоавтографией.

Во всех случаях геномная ДНК выделяли либо из культуры клеток исследуемых лиц, либо из клеток крови.