Настройка дискриминатора.
Как было видно из предыдущего рисунка приборы регистрируют, помимо лейкоцитов, множество различных объектов – агрегаты тромбоцитов, остатки лизированных эритроцитов и т.п. Особенно ярко и наглядно это проявляется на образцах, приготовленных по «безотмывочной» технологии (из образцов не удаляются остатки разрушенных эритроцитов). Наличие данных объектов приводит к тому, что прибор очень быстро набирает число событий, установленное для остановки сбора данных «по умолчанию». Следовательно, необходимо избавиться от регистрации лишних событий. Необходимо ввести такие значения дискриминатора, чтобы были видны все основные популяции клеток анализируемого образца, а частицы, которые не являются клетками (дебрис), не попадали в зону анализа. В приборах Navios™ и Gallios™, это ограничение «по умолчанию» ставится на канал малоуглового рассеяния света. Для того, чтобы изменить значения дискриминатора необходимо обратиться к окну “Cytometer Control”. В правой части окна напротив каждого из каналов регистрации сигнала есть графа под названием “Discr.” Для того, чтобы изменить значение дискриминатора, необходимо левой кнопкой мыши (действие 1) нажать на ячейку столбца “Discr.” Напротив интересующего Вас канала (в этом случае – FS), после чего справа в окне “Cytometer Control” у Вас активизируется серый бегунок. Нажимая левой кнопкой мыши по пространству над бегунком (действие 2), Вы можете увеличивать значения дискриминатора, тем самым поднимая порог чувствительности прибора на 10 единиц шкалы FS, если нажимаете под бегунком (действие 3) – снижаете значения дискриминатора, тем самым понижая 10 единиц шкалы FS порог чувствительности прибора. Если Вам необходима более точная настройка, то для этого предназначены боковые кнопки осе, нажатие на эти клавиши левой кнопкой мыши приводит к увеличению (действие 4) или уменьшению (действие 5) значений дискриминатора на 1.
Для примера высоких и низких значений дискриминатора было проанализировано по 10000 событий для каждой из гистограмм.
На данном рисунке приведен пример очень низкого значения дискриминатора – в поле анализа попадает очень много посторонних частиц (дебриса). Необходимо повысить значение дискриминатора!!! Из 10000 событий более половины приходится на дебрис | |
На данном рисунке приведен пример очень высокого значения дискриминатора. Обратите внимание, что часть популяции лимфоцитов на попадает в зону анализа! Необходимо понизить значения дискриминатора. | |
На данном рисунке приведены оптимальные значения дискриминатора. Видны все основные популяции лейкоцитов, четко отделимые друг от друга, а между лимфоцитами и дебрисом остается свободное пространство. Дебрис ни в коем случае нельзя целиком удалять из зоны анализа, так как эти частицы в данном случае служат отличным ориентиром для того, чтобы знать, не потеряли ли мы лимфоциты при настройке!!! |
Дата добавления: 2021-03-18; просмотров: 322;