Качественное обнаружение

Для качественных реакций на сапонины готовят водное извлечение из РС 1:10, нагревая его на водяной бане в течение 10 мин. Охлаждают, фильтруют и с фильтратом проводят качественные реакции.

При обнаружении сапонинов в РС используют реакции трех типов:

1. Реакции, основанные на физических свойствах сапонинов.

2. Реакции, основанные на химических свойствах сапонинов.

3. Реакции, основанные на биологических свойствах сапонинов.

К первой группе относится реакция пенообразования. Это не только чувствительная, но и довольно характерная проба, т.к. других веществ, обладающих такой способностью к пенообразованию, в растениях не встречается. Для ее выполнения берут две пробирки, в одну приливают определенный объем 0,1 н. NаОН (рН=13), в другую 0,1 н. раствор НСl (рН=1). В обе пробирки добавляют по 3-4 капли извлечения или раствора сапонина и сильно встряхивают. Если в сырье содержатся тритерпеновые сапонины, то в обеих пробирках образуется пена, равная по объему и стойкости. При наличии сапонинов стероидной группы в щелочной среде образуется пена, в несколько раз больше по объему и стойкости.

Ко второй группе обнаружения сапонинов в РС относятся реакции осаждения сапонинов и цветные реакции. Из водных растворов сапонины осаждаются гидроксидом бария и магния, солями меди, ацетатом свинца (тритерпеновые сапонины осаждаются средним ацетатом свинца, стероидные – основным). Из спиртовых извлечений (или растворов) стероидные и тритерпеновые сапонины выпадают в осадок при добавлении спиртового раствора холестерина в виде холестеридов.

К 2 мл водного извлечения прибавляют 1 мл 10% раствора нитрата натрия и 1 каплю концентрированной серной кислоты. Появляется кроваво-красное окрашивание.

К 2 мл водного извлечения прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты, 1 мл этилового спирта и 1 каплю 10% раствора сернокислого железа. При нагревании появляется сине-зеленое окрашивание (реакция Лафона).

Стероидные сапонины, как и сердечные гликозиды, дают реакцию Либермана-Бурхардта с образованием розового окрашивания, переходящего в зелено-синее.

К третьей группе реакций на сапонины относится реакция гемолиза эритроцитов крови за счет образования комплексов с холестерином мембран эритроцитов, вследствие чего оболочка эритроцита из полупроницаемой становится проницаемой, и гемоглобин выходит в плазму крови, окрашивая ее в красный цвет.

К 1 мл извлечения на изотоническом растворе добавляют 1 мл 2% взвеси эритроцитов в изотоническом растворе. Кровь становится прозрачной, ярко-красной (гемолиз). Ввиду того, что различные сапонины при одинаковой концентрации имеют разный гемолитический индекс (механизм гемолиза также различен), каждое сырье должно иметь свой стандарт – раствор чистого сапонина.

Для обнаружения сапонинов в растениях методом хроматографии используют спиртовые извлечения из сырья, которые хроматографируют в условиях, указанных в нормативной документации и после высушивания обрабатывают соответствующими реактивами. При определении стероидных сапонинов хроматограмму опрыскивают реактивом Санье (5% спиртовым раствором ванилина) и 10 мин нагревают в сушильном шкафу при температуре 110°С, затем опрыскивают 50% раствором серной кислоты и снова высушивают. При наличии стероидных гликозидов появляются пятна желтого цвета.

При определении тритерпеновых сапонинов (в случае аралозидов) хроматограмму опрыскивают 20% раствором серной кислоты, затем нагревают в сушильном шкафу при температуре 110°С в течение 10 мин. Аралозиды проявляются в виде пятен вишневого цвета.