Растворы, реактивы, аппаратура.

1. Стандартный раствор a-аланина, 0,5 мг/мл

2. Стандартный раствор аспарагиновой кислоты, 0,5 мг/мл

3. Раствор нингидрина 0,25% в водонасыщенном н-бутиловом спирте

4. Подвижная фаза – н-бутанола, ледяной уксусной кислоты и воды в объемном соотношении (4:1:5)

5. Хроматографическая бумага № 1 или № 2

6. Капилляры стеклянные

7. Хроматографическая камера

Выполнение работы

1. На предварительно подготовленной хроматографической бумаге простым карандашом намечают контуры «фитиля» длиной 40 мм и шириной 4 мм (см. рис.2).

2. На центр бумаги с помощью капилляра наносят каплю раствора разделяемой смеси. Раствор наносят в несколько приемов, чтобы впитывание происходило за счет капиллярных сил бумаги. Образовавшееся пятно осторожно обводят простым карандашом, т.е. фиксируют его положение на бумаге. Бумагу высушивают, вырезают «фитиль», как показано на схеме.

3. В хроматографическую камеру помещают кристаллизатор и тигель с 10 мл подвижной фазы. На кристаллизатор сверху помещают круг бумаги, следя за тем, чтобы «фитиль» был погружен в растворитель, и закрывают камеру крышкой. Во время разделения не рекомендуется открывать крышку камеры, перемещать камеру.

3. Когда произойдет размывание первичного пятна растворителем, и фронт ПФ пройдет расстояние, не доходя до края бумаги, бумагу вынимают, отмечают карандашом границы фронта растворителя, высушивают в токе теплого воздуха и приступают к проявлению зон.

4. Для проявления зон локализации аспарагиновой кислоты и a-аланина бумагу опрыскивают проявителем из стеклянного пульверизатора. Из появляющихся двух кольцевых окрашенных зон локализации первая принадлежит аспарагиновой кислоте, вторая – a-аланину.

5. Рассчитывают для обеих аминокислот значения R_f , считая началом их пути наружную границу первоначального пятна, отмеченную карандашом, а концом пути – наружные границы появившихся после проявления кольцевых зон локализации. Расстояние же, пройденное фронтом растворителя, мм, отсчитывают от центра хроматограммы (центра бумажного круга).

6. Рассчитывают коээфициент разделения a как отношение подвижностей R_f и оценивают степень разделения аминокислот.

ЛИТЕРАТУРА

1. Васильев В. П. Аналитическая химия. Ч. 2– М.: Дрофа, 2007. 384 с.

2. Основы аналитической химии. 2 кн. /Под ред. Ю. А. Золотова.– М.: Высшая школа, 2004. –359 с. (кн.1), 503 с. (кн.2)

3. Ю.Я.Харитонов. Аналитическая химия. Аналитика. т. 1, 2.– М.: Высшая школа, 2001.– 615 с., 559 с.

4. Аналитическая химия. в 3-х т. /под ред. Л. Н. Москвина. – М.: Академия, 2008. Т. 1– 576 с., Т. 2– 304 с.

5. Кристиан Г. Аналитическая химия: в 2 т.: пер. с англ. – М.: БИНОМ, 2009.– Т. 1. 623 с Т. 2. 504 с.

6. Отто М. Современные методы аналитической химии.– М.: Техносфера, 2008.– 543 с.

7. Васильев В. П. Аналитическая химия: лабораторный практикум / В. П. Васильев, Р. П. Морозова, Л. А. Кочергина.– 3-е изд., стер.– М. : Дрофа, 2006.– 414 с.

8. Аналитическая химия и физико-химические методы анализа/Под ред. О.М.Петрухина. – М.: Химия, 2001. – 496 с.

9. Основы аналитической химии.Практическое руководство. Под ред.Ю.А.Золотова. – М.: Химия, 2001.– 463 с.

10. Гольберт К. А. Вигдергауз М. С. Введение в газовую хроматографию.– М.: Химия, 1990. – 351 с.

11. Столяров Б. В. Руководство к практическим работам по газовой хроматографии: учебное пособие / Б. В. Столяров, И. М. Савинов, А. Г. Витенберг.– Л.: Химия, 1988.– 335 с.

12. Аналитическая хроматография / К. И. Сакодынский, В. В. Бражников, С. А. Волков и др.– М.: Химия, 1993.– 463 с.:

13. Айвазов Б.В. Введение в хроматографию. – М.: Высшая школа, 1983. – 250с.

14. Вяхирев Д.А., Шушунова А.Ф. Руководство по газовой хроматографии. – М.: Высшая школа, 1987. – 335с.

15. Дорохова Е. Н., Прохорова Т.В. Аналитическая химия. Физико- химические методы анализа. – М.: Высшая школа, 1991. – 256с.