Работа 3. Подсчет лейкоцитарной формулы.

Оснащение: окрашенные мазки периферической крови, микроскоп, иммерсионное масло.

Принцип метода: подсчет производят в готовых окрашенных мазках периферической крови под микроскопом с использованием иммерсионного объектива.

Ход работы: на предметное стекло с готовым мазком крови капните иммерсионное масло. Погрузите иммерсионный объектив микроскопа в каплю масла. Настройте микроскоп. Считать лучше в самом тонком месте мазка – ближе к его краям. Подсчет рекомендуется производить всегда в одном порядке: одну половину клеток считать в верхней, а другую – в нижней частях мазка, не заходя на самый край и середину. Среди многочисленных эритроцитов, найдите лейкоциты и отдифференцируйте их. Из 100 подсчитанных клеток выведите процентное соотношение отдельных видов лейкоцитов.

Оформление результатов работы:полученные результаты подсчета лейкоцитарной формулы занесите в тетрадь протоколов опытов, оцените их и сделайте вывод, сравнив с нормой.

IV. ФИЗИОЛОГИЯ ЭРИТРОЦИТОВ. ГЕМОГЛОБИН. СКОРОСТЬ ОСЕДАНИЯ ЭРИТРОЦИТОВ. ГЕМОЛИЗ. ОСМОТИЧЕСКАЯ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ЭРИТРОЦИТОВ.

Эритроциты – красные кровяные клетки, не содержащие ядра (рис.9). У мужчин в 1 мкл крови содержится в среднем 4,5-5,5 млн. (около 5,2 млн. эритроцитов или 5,2 * 10¹²/л). У женщин эритроцитов меньше: не превышает 4-5 млн. в 1 мкл (около 4,7 * 10¹²/л).

Функции эритроцитов:

1.Транспортная – перенос кислорода от легких к тканям и углекислого газа от тканей к альвеолам легких. Возможность выполнять эту функцию связана с особенностями строения эритроцита: он лишен ядра, 90% его массы составляет гемоглобин, остальные 10% приходятся на белки, липиды, холестерин, минеральные соли.

Рисунок 9. Эритроциты человека (электронная микроскопия). Форма эритроцитов напоминает двояковогнутый диск.

Кроме газов эритроциты переносят аминокислоты, пептиды, нуклеотиды к различным органам и тканям.

2. Участие в иммунных реакциях – агглютинации, лизиса и т.п., что связано с наличием в мембране эритроцитов комплекса специфических соединений – антигенов (агглютиногенов).

3. Детоксицирующая функция – способность адсорбировать токсические вещества и их инактивировать.

4. Участие в стабилизации кислотно-основного состояния крови за счет гемоглобина и фермента карбоангидразы.

5. Участие в процессах свертывания крови за счет адсорбции на мембране эритроцитов ферментов этих систем.

Свойства эритроцитов.

1. Пластичность (деформируемость) – это способность эритроцитов к обратимой деформации при прохождении через микропоры и узкие извитые капилляры диаметром до 2,5-3 мкм. Это свойство обеспечивается благодаря особой форме эритроцита – двояковогнутого диска.

2. Осмотическая стойкость эритроцитов. Осмотическое давление в эритроцитах несколько выше, чем в плазме, что обеспечивает тургор клеток. Оно создается более высокой внутриклеточной концентрацией белков по сравнению с плазмой крови.

3. Агрегация эритроцитов. При замедлении движения крови и повышении ее вязкости эритроциты образуют агрегаты или монетные столбики. Вначале агрегация носит обратимый характер, но при более длительном нарушении кровотока образуются истинные агрегаты, что может привести к микротромбообразованию.

4. Эритроциты способны отталкиваться друг от друга, что связано со строением мембраны эритроцитов. Гликопротеины, составляющие 52% массы мембраны, содержат сиаловую кислоту, которая придает отрицательный заряд эритроцитам.

Эритроцит функционирует максимум 120 дней, в среднем 60-90 дней. По мере старения способность эритроцитов к деформации снижается, а превращение их в сфероциты (имеющие форму шара) за счет изменения цитоскелета приводит к тому, что они не могут проходить через капилляры диаметром до 3 мкм.

Эритроциты разрушаются внутри сосудов (внутрисосудистый гемолиз) или захватываются и разрушаются макрофагами в селезенке, купферовских клетках печени и костном мозге (внутриклеточный гемолиз).

Гемоглобин (Hb)

Гемоглобин является основной составной частью эритроцитов и относится к числу важнейших дыхательных белков, осуществляющих транспорт О₂ и СО₂. Также гемоглобин выполняет буферную функцию – способен связывать ионы водорода.

В каждом эритроците содержится около 28 млн молекул гемоглобина. Гемоглобин – сложный белок – относится к группе хромопротеидов (гемопротеидов), состоит из четырех железосодержащих групп гема (4%) и белка глобина (96%).

В норме у мужчин содержание гемоглобина составляет 130-160 (140-160) г/л, у женщин – 120-150 (120-140) г/л.

Гемоглобин синтезируется эритробластами и нормобластами костного мозга. При разрушении эритроцитов гемоглобин после отщепления гема превращается в желчный пигмент билирубин. Последний с желчью поступает в кишечник, где превращается в стеркобилин и уробилин, выводимые с калом и мочой.

Гемоглобин человека имеет несколькофизиологических разновидностей:

1. HbР (примитивный) – такой гемоглобин характерен для эмбрионов в первые 7-12 недель внутриутробного развития. В последствии он замещается на HbF;

2. HbF фетальный (faetus – плод) – содержится преимущественно у плодов. К моменту рождения ребенка на его долю приходится 70-90% Hb. Фетальный гемоглобин обладает более высоким сродством к кислороду, чем HbА, что позволяет тканям плода не испытывать гипоксии. Замещается на HbА к году жизни.

3. HbА(аdult – взрослый) - он составляет основную часть нормального Hb взрослого человека.

Гемоглобин обладает способностью обратимо присоединять кислород. Каждая молекула гемоглобина содержит 4 атома двухвалентного железа, каждый из которых свободно связывается с 1 молекулой кислорода. Следовательно, одна молекула гемоглобина транспортирует 4 молекулы кислорода.

1г гемоглобина связывает 1,34 мл кислорода. При присоединении О₂ валентность железа не меняется, а сам кислород не переходит в ионную форму и переносится в виде молекулярного кислорода к тканям, где легко освобождается в тканевую жидкость.