Работа 2. Определение осмотической резистентности эритроцитов.

Оснащение: раствор NaCl убывающей концентрации: 0,9; 0,7; 0,48 и 0,28%; дистиллированная вода; эфир; пробирки (6 штук); пипетка; маркер.

Принцип метода:в гипотонических растворах эритроциты набухают вследствие поступления воды в эритроцит по закону осмоса. Это продолжается до тех пор, пока мембрана клеток не лопнет. Первыми разрушаются старые или поврежденные эритроциты. Выходящий в раствор гемоглобин окрашивает его в красный цвет, а сама кровь становится прозрачной («лаковая кровь»).

Ход работы: промаркируйте шесть пробирок. В четыре из них налейте по 5 мл раствора NaCl разной концентрации, в пятую – 5 мл дистиллированной воды, а в шестую 4 мл физиологического раствора и 1 мл эфира. В каждую пробирку добавьте по 0,02 мл крови, осторожно перемешайте и оставьте пробирки на 1 час при комнатной температуре, после чего определите границы осмотической резистентности - минимальную (начало гемолиза - слабое розовое окрашивание надосадочной жидкости) и максимальную (полный гемолиз - эритроциты полностью разрушаются («лаковая кровь»)).

Оформление результатов работы: опишите полученные результаты в тетради протоколов опытов, обращая внимание на цвет надосадочной жидкости и наличие осадка эритроцитов на дне пробирки (рекомендуется сделать цветной рисунок или оформить в виде таблицы 4). Определите границы осмотической резистентности эритроцитов, оцените их и сделайте вывод, сравнив с нормой, опишите химический гемолиз.

Таблица 4.

Определение границ осмотической стойкости эритроцитов.

V. ФИЗИОЛОГИЯ ТРОМБОЦИТОВ. ГЕМОСТАЗ. ГРУППЫ КРОВИ.

Физиология тромбоцитов.

Тромбоциты – или кровяные пластинки - это маленькие плоские клетки разнообразной формы (в основном овальной), не имеющие ядра, диаметром 1-4 мкм (рис.12). Продолжительность их жизни составляет 8-11 дней, после чего они разрушаются в печени, легких и селезенке.

Рис. 12. Тромбоцит (электронная микроскопия)

В 1 литре крови их содержится 150–350 * 10⁹/л (200-400 * 10⁹/л). Из общего количества тромбоцитов в крови находится 70%, в селезенке – 30%.

Продолжительность жизни тромбоцитов 6-10 дней. Клетки разрушаются в костном мозге, селезенке и печени.

Тромбоциты выполняют следующие функции:

1)участие в процессе свертывания крови – за счет тромбоцитарных факторов свертывания крови;

2)ангиотрофическая – проявляется в том, что они оказывают влияние на структуру и функцию сосудов микроциркуляции, питая эндотелиальные клетки капилляров;

3)регуляция тонуса сосудистой стенки за счет серотонина, находящегося в гранулах тромбоцитов, и тромбоксана А₂, образующегося из арахидоновой кислоты в процессе агрегации тромбоцитов.

Тромбоциты обладают следующими свойствами:

1)фагоцитоз;

2)амебовидная подвижность;

3)секреторная активность;

4)адгезия (прилипание);

5)агрегация (скучивание).

Адгезия – это способность тромбоцитов прилипать к чужеродной поверхности, в частности к измененной сосудистой стенке. При соприкосновении с чужеродной поверхностью тромбоциты распластываются и выпускают псевдоподии.

Агрегация – склеивание тромбоцитов друг с другом. Сначала развивается обратимая, а затем при появлении активного фермента тромбина агрегация становится необратимой.

В тромбоцитах обнаружено много специфических соединений, участвующих в свертывании крови. Их называют тромбоцитарными (пластиночными) факторами и нумеруют арабскими цифрами. Наиболее важными являются фактор 3 – тромбоцитарный тромбопластин или тромбопластический фактор и фактор 6 – тромбостенин.

Система гемостаза.

Гемостаз – это процесс остановки кровотечения. Однако следует помнить, что в организме существует единая система, которая также поддерживает жидкое состояние крови и растворение тромба после прекращения кровотечения (фибринолиз), восстанавливая проходимость сосуда.

Процесс гемостаза протекает в два этапа:

1. сосудисто-тромбоцитарный (первичный) гемостаз;

2. коагуляционный (вторичный).

Первичный гемостаз

Сосудисто-тромбоцитарный механизм гемостаза обеспечивает остановку кровотечения в мельчайших сосудах (сосудах микроциркуляторного русла), где имеется низкое кровяное давление и малый просвет сосудов. В них остановка кровотечения может произойти за счет:

1. спазма сосудов;

2. образования тромбоцитарной пробки агрегатами тромбоцитов;

3. сочетания того и другого.

В результате адгезии тромбоцитов к соединительно-тканным волокнам в области краев раны, мембрана этих клеток становится более проницаемой и из них выходят АТФ, АДФ и сосудосуживающие вещества (серотонин и катехоламины), а также тромбоцитарный фактор 3.

В результате действия сосудосуживающих веществ, просвет сосудов уменьшается (возникает функциональная ишемия) и перекрывается тромбоцитами, прилипшими к коллагеновым волокнам.

Выделившийся АДФ вызывает дальнейшую агрегацию тромбоцитов, ускоряя тем самым закупорку просвета сосудов. Агрегация тромбоцитов под действием АДФ носит обратимый характер. Тромбоцитарная пробка пропускает через себя плазму крови. Далее наступает необратимая агрегация тромбоцитов, при которой тромбоцитарная пробка становится непроницаемой для крови. Эта реакция возникает под влиянием тромбина, изменяющего структуру тромбоцитов. Далее из тромбоцитов выделяется фактор 6 – тромбостенин, под влиянием которого происходит сокращение (ретракция) тромбоцитарной пробки, образуется тромбоцитарный тромб. Он прочно закрывает просвет микрососуда и кровотечение останавливается.