Аналитический этап. Аппаратура, используемая для подсчета форменных элементов.

В настоящее время подсчет и анализ клеток крови проводят гематологические анализаторы (рис. 4). Это более точный метод анализа крови по сравнению с визуальной оценкой концентрации форменных элементов крови (ФЭК). При исследовании крови прибором жесткие требования предъявляют к этапу забора крови и применяемым растворам, так как данная техника не терпит сгустков и присутствия посторонних частиц. При взятии крови оптимальным является использование пробирок с мелкодисперсным порошком «К ЭДТА», нанесенным на их внутреннюю поверхность. В пробирках данный антикоагулянт быстро растворяется в крови и надежно защищает от образования микросгустков.

Рисунок 5. Современные электронные гематологические счетчики позволяют автоматизировать процесс подсчета форменных элементов крови.

К преимуществам гематологических анализаторов относят:

1) высокая производительность (до 100-120 проб в час),

2) небольшой объем крови для анализа (12-150 мкл),

3) анализ большого количества (десятки тысяч) клеток,

4) высокая точность и воспроизводимость,

5) оценка 18-30 и более параметров одновременно,

6) графическое представление результатов исследований в виде гистограмм или скатерограмм.

По степени сложности (по используемым методам) и по количеству определяемых показателей (в основном из-за способности дифференцировать лейкоциты) их разделяют на 3 основных класса.

I класс. Анализаторы определяют 18-20 параметров, включая расчетные показатели эритроцитов и тромбоцитов, гистограммы распределения лейкоцитов, эритроцитов и тромбоцитов по объему. Лейкоциты частично дифференцируют на 3 популяции - лимфоциты, гранулоциты и средние клетки (представлены в основном моноцитами) (рис. 6).

Рисунок 6. Анализаторы I класса определяют эритроцитарные и тромбоцитарные показатели, строят гистограммы распределения клеток по объему. Лейкоциты (WBC) делят на лимфоциты (Lymph), гранулоциты (Gran) и моноциты (Mon).

В основе работы таких анализаторов используется кондуктометрический метод (или апертуро-импедансный). Принцип метода основан на учете импульсов, которые образуются при прохождении клеток крови через микроотверстие (апертуру) датчика. Каждое событие - прохождение клетки через этот узкий канал - сопровождается возрастанием омического сопротивления, что вызывает появление электрического импульса, количество и характер которого регистрируется прибором (рис. 7).

Рисунок. 7. Апертуро-импедансный метод Д.Калтера. Ведется подсчет числа и определение характера импульсов, возникающих при прохождении клеток через микроотверстие, по обе стороны которого расположены электроды.

Дифференцировка лейкоцитов кондуктометрическим методом на основные субпопуляции невозможна из-за близости их объемов. Для их разделения используются гемолитики, благодаря которым различные виды лейкоцитов изменяют свои размеры в разной степени (в зависимости от объема цитоплазмы, величины и формы ядра, присутствия гранул). На образующейся лейкограмме лимфоциты образуют зону малых объемов (35-90 фл), гранулоциты (нейтрофилы, базофилы и эозинофилы) - область больших объемов (120-400 фл). Между двумя пиками имеется зона так называемых "средних лейкоцитов" (90-120 фл), которую формируют моноциты.

II класс. Приборы проводят развернутый анализ крови с полной дифференцировкой лейкоцитов по 5 параметрам (нейтрофилы, эозинофилы, базофилы, моноциты и лимфоциты). Кроме того, предоставляют не только гистограммы распределения эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов по объему, но и скатерограммы (рис.8 ).

Рисунок .8. Скатерограмма.

Таблица 2.