Лабораторная работа 1. Правила работы в микробиологической лаборатории. Основы техники микроскопии с микробиологическими объектами.

Иммерсионные объективы и правила работы с ними. Приготовление препаратов фиксированных клеток микроорганизмов.

Материал и оборудование: предметные стекла, спиртовки, бактериологические петли, вода дистиллированная, колбы с водой, кристаллизаторы с подставками, наборы красителей, культуры микроорганизмов на косых срезах в пробирках, микроскопы, объективы иммерсионные, иммерсия (кедровое масло), плакаты по теме.

Цели занятия:

1. Изучить правила работы в микробиологической лаборатории, правила ТБ и ОТ, правила работы с культурами микроорганизмов.

2. Повторить устройство микроскопа и изучить правила работы с иммерсионным объективом.

3. Освоить методику приготовления фиксированных препаратов микроорганизмов и уметь определить морфологический тип клеток микроорганизмов и характер их расположения.

Задание 1.1

Запишите в тетрадь основные правила работы и ТБ в микробиологической лаборатории. Изучите правила работы с культурами микроорганизмов.

Задание 1.2

Изучите правила работы с иммерсионным объективом, запишите их в тетрадь, укажите преимущества иммерсионной системы. Дайте краткую характеристику типам микроскопии.

Задание 1.3

Изучите методику приготовления препаратов фиксированных клеток, запишите основные этапы: приготовление мазка; высушивание; фиксация и окраска; опишите технику этих этапов и значение. Отработайте некоторые отдельные приемы.

Приготовьте фиксированный препарат и рассмотрите его под малым и большим (иммерсионным) увеличением. Зарисуйте препарат, укажите тип клеток по морфологии и расположению. Определите присутствие эндоспор.

Лабораторная работа 2. Техника микроскопирования микробиологических объектов: приготовление препаратов живых клеток микроорганизмов. Движение микроорганизмов.

Цели занятия:

1. Изучить: способы и типы движения микроорганизмов; особенности строения органов и структур движения микроорганизмов.

2. Изучить методику приготовления прижизненных препаратов и научиться готовить препараты живых клеток микроорганизмов.

3. Повторить правила работы с микроскопом с сухими объективами, рассмотреть приготовленные препараты, определить характер движения клеток.

Задание 2.1

Изучите тему «Движение микроорганизмов». Запишите в тетраде типы движения бактерий, зарисуйте схему: строения жгутика и строение (схематическое) спирохеты. Укажите, какие кольца имеет базальная структура и где они расположены в стуктуре клеточной оболочки (Г+; Г-).

Задание 2.2

Запишите методы «раздавленной капли» и метод «висячей капли» для приготовления «прижизненных» препаратов. Запишите методику получения накопительной культуры сенной и картофельной палочки. Используя суточные культуры сенной палочки, приготовьте препараты живых клеток микроорганизмов.

Задание 2.3

Рассмотрите приготовленные препараты при малом и большом увеличении. Найдите наилучшие объекты и определите характер и тип движения. Увиденное зарисуйте, отметив увеличение, характер и тип движения.

Задание 2. 4

Рассмотрите извитые формы, используя инкубированный настой навозной жижи. Приготовьте фиксированный и окрашенный фуксином препарат. Рассмотрите препарат как демонстрационный, определите тип клеток, зарисуйте типы извитых клеток микроорганизмов.

Лабораторная работа 3. Цитохимические методы изучения клеток микроорганизмов. Дифференциальные способы окраски клеток прокариот. Методы выявления эндоспор и капсул. Окраска по Граму.

Цели занятия:

1. Используя знания о структурной организации клетки прокариот выяснить сущность и причины дифференциации клеток по методу Грама.

2. Научиться использовать методику Грама, отработать технику микроскопирования с иммерсионным объективом.

3. Изучить тему «Рост и размножение микроорганизмов».

4. Изучить биологическое значение, строение спор и основные этапы и способы спорообразования у спорообразующихся бактерий.

5. Выяснить структуру и химический состав капсул, биологический смысл капсулообразования, функции слизистых образований.

6. Научиться использовать методы выявления спор и капсул и отработать навыки работы с микроскопом.

Оборудование: предметные стекла, спиртовки, кристаллизаторы, петли бактериологические, наборы красителей, вода дистиллированная в стерильных пробирках, вода в колбах, культуры микроорганизмов (предположительно Грамположительных и Грамотрицательных), культуры спорообразующих бактерий, культуры рода Азотобактер на чашках Петри, микроскопы.

Задание 3.1

Повторить структуру и химический состав оболочек клеток грациликутных и фирмакутных бактерий. Зарисовать в тетради схемы строения оболочек прокариот, укажите вещества оболочек.

Задание 3.2

Изучите методику окраски клеток по Граму, запишите последовательность операций. Сделайте вывод о причинах различной окраски по этому методу.

Выполните на предметном стекле два мазка разных культур микроорганизмов и окрасьте их по Граму. Рассмотрите препараты с иммерсией, увиденное зарисуйте. Укажите тип клеток по Граму, морфологию клеток. Запишите вывод, указав причины разной окраски клеток.

Задание 3.3

Зарисуйте схему строения эндоспоры, типы эндоспор.

Изучите метод выявления спор по Пешкову, запишите его в тетрадь. Выполните окраску мазков исследуемых культур, рассмотрите с иммерсией. Укажите отличие эндоспор и вегетативных клеток на препарате. Зарисуйте препарат, напишите вывод.

Задание 3.4

Запишите известные способы выявления капсул, изучите их строение и биологическое значение.

Проведите выявление капсул у почвенных бактерий рода Азотобактер методом позитивного и негативного контрастирования. Рассмотрите на большом увеличении (без иммерсии!) с сухими объективами.

Литература: Микробиология с основами вирусологии. Методические указания для лабораторных занятий. Т.М. Царенко. – Витебск. Изд-во ВГУ. 1999.